Unterschied zwischen Klonen und Subklonen

Schlüsselunterschied - Klonen vs Subkloning
 

Klonieren und Subklonierung sind molekulare biologische Verfahren, die genetisch identische Zellen oder Organismen mit der DNA oder dem von interessierenden DNINDE erzeugen. Klonierung ist eine Technik, bei der das interessierte Gen oder die DNA in einen Vektor, die Replikation in einem Wirtsbakterium und die Produktion von Zellen oder Organismen, die genaue Kopien des genetischen Make -ups sind. Die Subklonierung ist eine Technik, die das Interesse des Gens, das bereits in einen Vektor eingefügt wird. Der wichtigste Unterschied zwischen Klonen und Subklonieren ist das, Setzen Sie das Klonierungsprozess beim Klonieren, sobald in einen Vektor in einem Vektor ligiert ist, während im Subklonieren das bereits geklonte Gen von Interesse vom Elternvektor getrennt und erneut in einen Empfängervektor eingefügt wird und den Prozess fortsetzt.

INHALT
1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was klonen?
3. Was ist Subklonierung
4. Nebeneinander Vergleich - Klonieren gegen Unterklammerung
5. Zusammenfassung

Was klonen??

Klonierung ist das Verfahren, das gentechnisch identische Organismen oder Zellen erzeugt. In der Natur erfolgt das Klonen im Mittel der asexuellen Reproduktion. Wenn es keine genetische Rekombination oder Veränderung gibt, erhalten Tochterzellen die gleiche genetische Zusammensetzung des Elternteils. Prokaryotische und eukaryotische Organismen erzeugen Klone durch binäre Spaltung, Knospen, Mitose usw.  In der molekularen Biologie ist Klonierungsgene oder spezifische DNA -Fragmente eine beliebte Methode, um die Struktur und Funktion dieses bestimmten DNA -Abschnitts zu untersuchen.

Das Hauptziel der molekularen Klonierung ist es, Millionen von Kopien von genetisch identischen Zellen oder Organismen mit dem Interesse des DNA zu erstellen (hauptsächlich Gene). Es schafft Organismen mit genauen genetischen Kopien eines anderen. In erster Linie werden spezifische Gene in molekularen Studien kloniert, um strukturelle und funktionelle Informationen und für die DNA -Sequenzierung zu erhalten. Auch für die Herstellung spezifischer Proteine ​​oder Produkte in großem Maßstab wird das Klonieren weit verbreitet.

Klonenverfahren

Die grundlegenden Schritte des Klonierungsverfahrens sind wie folgt.

1. Identifizierung und Isolierung des interessierenden Gens. (Amplifikation des interessierenden Gens durch PCR).
2. Restriktionsverdauung des interessierenden Gens (Restriktionendonuklease schneiden das Gen).
3. Restriktionsverdauung der Vektor -DNA. (Die Vektor -DNA wird auch unter Verwendung der gleichen Restriktionsendonuklease geschnitten).
4. Einfügung des Gens in den Vektor und die Bildung des rekombinanten Moleküls.
5. Umwandlung des rekombinanten Vektors in ein Wirtsbakterium.
6. Die Isolierung und Identifizierung der transformierten Bakterien (Plasmidvektor sollte ein wählbares Gen enthalten, am häufigsten ein Antibiotikaresistenzgen zum Screening -transformierten Bakterien).
7. Rekombinante Genexpression im Wirt.

Abbildung_01: Klonierungsverfahren

Was ist Subklonierung?

Subklonierung ist ein Verfahren, um ein interessierendes Gen von einem Vektor zu einem anderen Vektor zu bewegen, um die Expression des Gens zu sehen, um die gewünschte Funktionalität des Gens zu erhalten. Bei dieser Methode sind zwei Vektoren beteiligt; nämlich Elternvektor und Zielvektor. Klonte Einsätze werden erneut in einen zweiten Vektor in der Unterklonierung bewegt. Das Ziel, das Gen vom ersten Vektor auf den zweiten Vektor zu übertragen. In diesem Verfahren werden zu Beginn Restriktionsenzyme verwendet.

Subklonierungsverfahren

Die grundlegenden Schritte der Subklonierung sind wie folgt.

1. Mit Hilfe von Restriktionsendonukleasen, Trennung der von Interesse am Spenderplasmid (Elternvektor) von Interesse von Interesse.
2. Amplifikation der interessierenden DNA mit PCR.
3. Reinigung des PCR -Produkts (DNA von Interesse) durch Gelelektrophorese.
4. Öffnung des Empfängerplasmids durch gleiche Restriktionsendonukleasen, die zur Trennung von DNA von Interesse am Elternplasmid verwendet werden.
5. Ligation der interessierenden DNA (Gen) in das Empfängerplasmid, um das subklonte Plasmid zu erzeugen.
6. Umwandlung des subklonierten Vektors in ein kompetentes Wirtsbakterium.
7. Screening transformierter Zellen.
8. Reinigung der Plasmid -DNA und Verwendung für die DNA -Sequenzierung oder Expression der Gene, um die gewünschten Produkte zu erhalten.

Die Subklonierung erfolgt gelegentlich, ein Gen aus der klonierten Genegruppe zu isolieren oder wenn das interessierende Gen in ein nützliches Plasmid übertragen wird, um die genaue Funktion des interessierenden Gens zu erkennen.

Abbildung_02: Subklonierungsverfahren

Was ist der Unterschied zwischen Klonen und Subklonieren?

Zusammenfassung - Klonen vs Unterkloning

Das Klonieren erzeugt gentechnisch identische Zellen oder Organismen mit dem eingefügten Gen oder der DNA von Interesse. Es führt durch die Trennung und Einführung der interessierenden DNA in einen Vektor und die Expression innerhalb eines Wirtsbakteriums. Subklonierung gibt ähnliche Schritte mit dem Klonen. Bei der Subklonierung wird jedoch bereits kloniertes DNA. Das ist der Hauptunterschied zwischen Klonierung und Subklonierung.

Verweise

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3. „Subklonierung.Subklonierung | Offene Zugangsartikel | Open Access Journals | Konferenzverfahren | Herausgeber | Autoren | Rezensenten | Wissenschaftliche Ereignisse. N.P., N.D. Netz. 06 März. 2017
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Bild mit freundlicher Genehmigung

1. Molekularklonierungsverfahren - durch CNX OpenStax [CC von 4).0] über Wikimedia Commons
2. Subklonierungsverfahren - vom ursprünglichen Uploader wurde Takometer bei englischer Wikipedia (übertragen von EN übertragen.Wikipedia nach Commons.) [CC von 2.5] über Wikimedia Commons