Unterschied zwischen stumpfen und klebriger Endligation
Schlüsselunterschied - Blunt gegen Sticky End -Ligation
Restriktionsendonukleasen sind spezifische Enzyme, die doppelsträngige DNA (dsDNA) schneiden. Sie sind auch als molekulare Schere in der molekularen Biologie bekannt. Restriktionsenzyme können spezifische kurze Sequenzen der dsDNA erkennen. Infolge der Spaltung durch diese Enzyme werden DNA -Fragmente mit verschiedenen Arten von Enden wie klebrigen Enden und stumpfen Enden erzeugt. Die DNA -Ligase ist ein Enzym, das in der Molekularbiologie verwendet wird, um zwei benachbarte DNA -Stränge durch die Bildung neuer Bindungen beizutragen. Der Schritt wird als Ligation bezeichnet und nach dem Typ der DNA -End -Ligation können sie als stumpfe Endligation und Sticky -End -Ligation bezeichnet werden. Der wichtigste Unterschied zwischen stumpfen und klebriger Endligation ist das Stumpfe Endligation tritt zwischen DNA -Fragmenten auf, die zwei stumpfe Enden enthalten wohingegen Sticky End -Ligation tritt zwischen 5 'und 3' Überhingen auf. Im Vergleich zur stumpfen Endligation ist die Sticky End -Ligation effizienter und stabiler.
INHALT
1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was ist stumpfe Endligation
3. Was ist klebrige Endligation
4. Nebenseitiger Vergleich - stumpf gegen klebrige Endligation
5. Zusammenfassung
Was ist eine stumpfe Endligation?
Einige Restriktionsendonukleasen können die DNA an den gegenüberliegenden Basen schneiden und stumpfe End -DNA -Fragmente erzeugen. Diese Enzyme sind als stumpfe Endschneider bekannt; Sie halten sich direkt in die Mitte des Restriktionsortes ab, ohne einzeln gestrandete überhängende Basen zu lassen. Stumpfe werden auch als nicht übergehängte Enden bezeichnet, da sie an den Enden keine überhängenden Basen haben. Beide Stränge enden von Basispaaren in stumpfen Enden. Gemeinsame stumpfen Endschneidemezye sind Ecorv Haeiii, Alui und Smai.
Stumpfe Endligation ist zwischen zwei stumpfen Enden beteiligt. Es ist keine Ligation hervorstehender Basen. Diese Ligation ist weniger effizient als die Sticky -End -Ligation. In einigen Fällen wird jedoch die stumpfe Endligation vorteilhafter als die Sticky -End -Ligation, insbesondere bei Ligieren von PCR -Produkten. PCR -Produkte werden immer mit stumpfen Enden hergestellt. Für die Ligation sind keine ergänzenden Enden in der DNA erforderlich.
Abbildung 01: Stumpfe Endproduktion durch Eco RV Enzym
Was ist eine Sticky End -Ligation?
Einige Restriktionsendonukleasen können dsDNA schneiden und am Ende ein überhängendes Stück einzelner Strängeln DNA hinterlassen. Diese Enden sind als klebrige oder überhängende Enden bekannt. Sticky End -Ligation tritt zwischen zwei DNA -Fragmenten auf, die übereinstimmende Überhänge enthalten, da die klebrigen Enden mit ungepaarten Basen besessen sind und ergänzende Basen erfordern, um Bindungen zu bilden. Daher ist es notwendig, das gleiche Restriktionsenzym für beide DNA -Quellen zu verwenden, um die passenden Ligationsfragmente zu erstellen.
Die Sticky -End -Ligation ist effizienter und bei Klonierungsprozessen oft sehr wünschenswert. Es gibt mehrere Restriktionsenzyme, die klebrige Enden produzieren. Sie sind Ecori, Bamhi, Hindiii usw.
Abbildung 02: Sticky End -Produktion von Eco RI Enzym
Was ist der Unterschied zwischen stumpfen und klebriger Endligation?
Stumpf gegen Sticky End -Ligation | |
| Stumpfe Endligation tritt zwischen zwei stumpfen End -DNA -Fragmenten auf. | Sticky End -Ligation tritt zwischen zwei passenden DNA -Fragmenten mit klebrigen Enden auf. |
| Enzyme | |
| Stumpfe Endschneider produzieren stumpfe Enden. | Klebrige Endschneider produzieren klebrige oder zusammenhängende Enden. |
| Erfordernis der passenden Ziele | |
| Es erfordert keine passenden Fragmente oder komplementären Basen. | Es erfordert ergänzende Basen an den Enden, um Basispaare zu bilden. |
| Effizienz | |
| Es ist weniger effizient als die Sticky -End -Ligation | Es ist effizienter als stumpfe Endligation. |
Zusammenfassung -Blunt gegen Sticky End -Ligation
Restriktionsendonukleasen können dsDNA spalten und DNA -Fragmente mit unterschiedlichen Enden produzieren. Sie erkennen bestimmte Sequenzen und beschränken die DNA, die klebrige und stumpfen Enden erzeugt. Klebrende Enden haben am Ende der Fragmente ungepaarte Basen. Stumpfe Enden werden aufgrund einer geraden Spaltung erzeugt und sie haben Basispaare an den Enden. Die Sticky End-Ligation erfordert zwei komplementäre einsträngige DNA-Stücke. Stumpfe Endligation erfolgt zwischen zwei stumpfen Endfragmenten. Dies ist der Unterschied zwischen stumpfen und klebriger Ligation.
Verweise:
1. Roberts, Richard J. „Wie Einschränkungsenzyme zu Arbeitspuren der molekularen Biologie wurden.Verfahren der National Academy of Sciences. National Acads Sciences, n.D. Netz. 12 Apr. 2017
2. Adnan, Amna. Verwendung von Restriktionsenzymen in der Biotechnologie. N.P., N.D. Netz. 12 Apr. 2017
Bild mit freundlicher Genehmigung:
1. „ECORV -Restriktionsseite.rsh ”von Ramin Herati - mit Inkscape (Public Domain) über Commons Wikimedia erstellt
2. "Restriktion Enzym Eco RI" von Tinastella - eigene Arbeit (Public Domain) über Commons Wikimedia
