Unterschied zwischen Nick -Translation und Endfüllung

Der Schlüsselunterschied Zwischen Nick -Übersetzung und Endfüllung ist das Nick Translation ist ein Prozess, der markierte DNA-Sonden für verschiedene Hybridisierungsreaktionen erzeugt, während die Endfüllung eine Technik ist, die stumpfe Fragmente erzeugt.

Nick -Translation und Endfüllung sind zwei Techniken, die in der molekularen Biologie verwendet werden. Die Nick -Translation wird zum Markieren von Sonden für die Hybridisierung verwendet, um spezifische Nukleotidsequenzen nachzuweisen. Die Endfüllung wird verwendet, um stumpfe Fragmente zu machen, die klebrige Enden mit einzelsträngigen Überhängen hatten. Beide Techniken haben eine große Bedeutung und werden routinemäßig in molekularen Forschungslabors durchgeführt.

INHALT

1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was ist Nick -Übersetzung 
3. Was ist die Endfüllung
4. Ähnlichkeiten zwischen Nick -Übersetzung und Endfüllung
5. Seite an Seite Vergleich - Nick Translation vs Endfüllung in tabellarischer Form
6. Zusammenfassung

Was ist Nick -Übersetzung?

Nick Translation ist eine wichtige Technik, mit der markierte Sonden für verschiedene molekulare biologische Techniken wie das Blotting hergestellt wurden, vor Ort Hybridisierung, fluoreszierend vor Ort Hybridisierung usw. Es ist ein in vitro Methode der DNA -Markierung. DNA -Sonden werden verwendet, um spezifische DNA- oder RNA -Sequenzen zu identifizieren. Mit Hilfe einer markierten Sonde können bestimmte Fragmente aus einer komplexen Mischung aus Nukleinsäure gekennzeichnet oder sichtbar werden. Daher werden markierte Sonden unter Verwendung verschiedener Techniken hergestellt. Die Nick -Translation ist eine solche Methode, die mit Hilfe der DNase 1- und DNA -Polymerase -1 -Enzyme markierte Sonden erzeugt.

Abbildung 01: Nick -Übersetzung

Der Nick -Translationsprozess beginnt mit der DNase 1 -Enzymaktivität. DNase 1 führt Kerben in das Phosphat-Rückgrat der doppelsträngigen DNA ein, indem sie Phosphodiesterbindungen zwischen Nukleotiden spalten. Sobald der Nick erstellt wurde, wird die freie 3' -Oh -Gruppe des Nukleotids produziert, und DNA -Polymerase 1 -Enzym wird darauf reagieren. 5 'bis 3' Exonuklease -Aktivität der DNA -Polymerase 1 entfernt Nukleotide vom Nick in Richtung 3 'Richtung des DNA -Strangs.

Gleichzeitig funktioniert die Polymeraseaktivität des DNA -Polymerase -1 -Enzyms und fügt Nukleotide hinzu, um die entfernten Nukleotide zu ersetzen. Wenn die Nukleotide markiert sind, tritt der Ersatz durch die markierten Nukleotide auf und markiert die DNA zur Identifizierung. Schließlich kann diese neu synthetisierte markierte DNA als Sonden in verschiedenen Hybridisierungsreaktionen verwendet werden.

Was ist die Endfüllung?

Die Endfüllung ist eine Technik, die in der molekularen Biologie verwendet wird, um abgestumpfte Fragmente zu machen. Restriktionsverdauung erzeugt Fragmente mit Überhängen. Diese Fragmente sind möglicherweise nicht kompatibel, um in Plasmidvektoren zu löschen. Vektoren werden oft abgestumpft, damit nicht kompatible Enden verbunden werden können. Daher können Fragmente mit Überhängen abgestumpft werden. Dieser Prozess wird als Endfüllung bezeichnet.

DNA -Polymerasen wie Klenow -Fragment der DNA -Polymerase I und T4 DNA -Polymerase katalysieren die Endfüllung. Sie fügen Nukleotide hinzu, um auszufüllen (5 '→ 3') und kauen zurück (3 '→ 5'). Sobald die klebrigen Enden gefüllt sind, werden sie stumpf und sie sind bereit, in einen Vektor zu löschen.

Darüber hinaus kann die Endfüllung verwendet werden, um DNA -Moleküle zu kennzeichnen. Es kann jedoch nur verwendet werden, um DNA -Moleküle mit klebrigen Enden zu kennzeichnen. Im Vergleich zur Nick -Translation ist die Endfüllung eine sanftere Methode, die selten DNA -Bruchs verursacht.

Was sind die Ähnlichkeiten zwischen Nick -Übersetzung und Endfüllung??

• Sowohl die Nick -Translation als auch die Endfüllung sind molekulare biologische Techniken.
• Sie können verwendet werden, um Sonden zu kennzeichnen.
• Beide sind in vitro

Was ist der Unterschied zwischen Nick -Translation und Endfüllung?

Nick Translation ist eine Technik, die markierte Sonden für die Hybridisierung erzeugt. Im Gegensatz dazu ist Endfüllung eine Technik, die stumpfe Fragmente für die Ligation in Vektoren erzeugt. Dies ist also der Hauptunterschied zwischen Nick -Translation und Endfüllung. Darüber hinaus erfordert die Nick -Übersetzung die Verwendung von 5'TO 3 'Exonuklease -Aktivität, während die Endfüllung nicht 5'to 3' Exonuklease -Aktivität erfordert.

Die folgenden Infografik tabelliert die Unterschiede zwischen Nick -Translation und Endfüllung ausführlicher.

Zusammenfassung -Nick -Übersetzung gegen Endfüllung

Die Nick -Translation ist eine Methode, die radioaktiv markierte Nukleotide in DNA integriert. Es synthetisiert markierte Sonden basierend auf den Aktivitäten von DNase 1 und E. coli DNA -Polymerase 1 -Enzyme. Die Endfüllung hingegen ist eine Technik, die stumpfe Fragmente erzeugt. Wenn die Fragmente klebrige Enden (einzelne Strängeln) haben. Die Endfüllung fügt kompatible Nukleotide hinzu und erzeugt stumpfe Endfragmente, um sie für die Ligation kompatibel zu machen. Dies fasst den Unterschied zwischen Nick -Translation und Endfüllung zusammen.

Referenz:

„Büscheln: Neb.”New England Biolabs: Reagenzien für die Biowissenschaftsbranche, hier erhältlich.
"Nick -Übersetzung - Ein Überblick". Sciencedirect.Com, 2020, hier erhältlich.

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1. "Fisch (fluoreszierende In -situ -Hybridisierung)" von Mrmatzer - eigene Arbeit (CC BY -SA 3.0) über Commons Wikimedia