Unterschied zwischen Nord südlich und westlichem Blotting

Schlüsselunterschied - Northern vs Southern gegen Western Blotting
 

Der Nachweis spezifischer Sequenzen von DNA, RNA und Proteinen ist für verschiedene Arten von Studien in der molekularen Biologie wesentlich. Gelelektrophorese ist eine Technik, die DNA, RNA und Proteine ​​nach ihren Größen trennt. Aus den Gelprofilen werden bestimmte DNA -Sequenz, RNA -Sequenz oder Protein durch die speziellen Techniken nachgewiesen. Es gibt drei verschiedene Typen Blotting -Methoden, nämlich Süd, Nord und Western. Der wichtigste Unterschied zwischen dem südlichen und westlichen Blot liegt bei der Art des Moleküls, das es aus einer Probe erkennt. Southern Blot ist eine Methode, die eine spezifische DNA -Sequenz aus einer DNA -Probe nachweist. Northern Blot ist eine Technik, die eine spezifische RNA -Sequenz aus einer RNA -Probe erkennt. Western Blot ist eine Methode, die ein spezifisches Protein aus einer Proteinprobe nachweist.

INHALT
1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was ist Southern Blotting
3. Was ist Northern Blotting
4. Was ist Western Blotting
5. Nebenseitiger Vergleich - Northern gegen Southern gegen Western Blotting
6. Zusammenfassung

Was ist Southern Blotting?

Die Southern Blotting -Technik wurde von E entwickelt. M. Südern im Jahr 1975 zur Identifizierung einer spezifischen DNA -Sequenz aus einer DNA -Probe. Dies ist die erste Blottechnik, die in der molekularen Biologie eingeführt wird. Es ermöglichte den Nachweis spezifischer Gene aus der DNA, spezifische Fragmente aus DNA usw. Es gibt mehrere Schritte an der Southern Blotting -Technik. Sie sind wie folgt.

1. DNA wird aus der Probe isoliert und mit Restriktionsendonukleasen verdaut.
2. Die verdaute Probe wird durch Agarosegelelektrophorese getrennt.
3. DNA -Fragmente im Gel werden unter Verwendung einer alkalischen Lösung in einzelne Stränge denaturiert.
4. Eine einzeln gestrandete DNA wird durch Kapillarübertragung auf eine Nitrocellulosefiltermembran übertragen.
5. Die übertragene DNA wird dauerhaft auf die Membran fixiert.
6. Die feste DNA an der Membran wird mit markierten Sonden hybridisiert.
7. Die ungebundene DNA wird durch Waschen von der Membran abgespült.
8. Röntgenfilm ist der Membran ausgesetzt und ein Autoradiograph wird vorbereitet.

Southern Blot wird für verschiedene Aspekte der molekularen Biologie angewendet. Es ist nützlich bei RFLP -Mapping, forensischen Studien, DNA.

Abbildung 01: Southern Blotting -Technik

Was ist Northern Blotting?

Northern Blot ist eine Methode, mit der eine spezifische RNA -Sequenz oder mRNA -Sequenz aus einer Probe nachgewiesen wurde, um die Genexpression zu untersuchen. Diese Technik wurde 1979 von Alwine, Kemp und Stark entwickelt. Es unterscheidet sich aufgrund mehrerer Schritte von den Saughern- und Western Blotting -Techniken. Diese Technik wird jedoch auch über Gelelektrophorese, Blot und Hybridisierung mit spezifischen markierten Sonden und Erkennung durchgeführt. Die Northern -Blotting -Technik wird wie folgt durchgeführt.

1. RNA wird aus der Probe extrahiert und durch Gelelektrophorese getrennt.
2. Die RNA wird vom Gel auf eine Blotmembran übertragen und fixiert.
3. Die Membran wird mit einer markierten Sonde behandelt, die aus cDNA oder RNA hergestellt wurde (die Sonde wird zu einer spezifischen Sequenz in der Probe komplementär).
4. Die Sonde wird mit der Membran inkubiert, um sie mit einer bestimmten Sequenz zu binden.
5. Ungebundene Sonden werden abgespült.
6. Hybridisierte Fragmente werden durch ein Autoradiograph nachgewiesen.

Northern Blot ist ein wichtiges Instrument zum Nachweis und der Quantifizierung von hybridisierten mRNA, der Untersuchung des RNA-Abbaus, der Bewertung der RNA-Halbwertszeit, des Nachweiss von RNA-Spleißen, der Untersuchung der Genexpression usw.

Abbildung 02: Northern Blotting

Was ist Western Blotting?

Western Blot ist eine Methode zum Nachweis eines spezifischen Proteins aus einem Proteingemisch mit markierter Antikörper. Daher ist Western Blot auch als als bekannt Immunoblot. Diese Technik wurde von Towbin eingeführt et al 1979 und es wird jetzt routinemäßig in den Labors zur Proteinanalyse durchgeführt. Schritte sind wie folgt.

1. Proteine ​​werden aus der Probe extrahiert
2. Proteine ​​werden durch ihre Größen unter Verwendung von Polyacrylamid -Gelelektrophorese getrennt
3. Trennte Moleküle werden durch Elektroporation in eine PVDF -Membran oder eine Nitrocellulosemembran übertragen
4. Die Membran ist für eine unspezifische Bindung mit den Antikörpern blockiert
5. Übertragte Proteine ​​sind mit primärem Antikörper gebunden (Enzym markierte Antikörper).
6. Die Membran wird gewaschen, um unspezifisch gebundene primäre Antikörper zu entfernen
7. Gebundene Antikörper werden durch Hinzufügen eines Substrats und nach Erfindung des gebildeten farbigen Niederschlags nachgewiesen

Western Blot ist nützlich beim Nachweis von Anti-HIV-Antikörpern in einer menschlichen Serumprobe. Western Blot kann auch als Bestätigungstest für Hepatitis B -Infektion und endgültige Test für Mad Cow -Krankheit verwendet werden.

Abbildung 03: Western Blotting

Was ist der Unterschied zwischen Nord südlich und westlichem Blotting?

Zusammenfassung -Northern gegen Southern gegen Western Blotting

Blotting ist eine spezielle Technik, die zur Identifizierung spezifischer DNA, RNA oder Protein aus den Proben entwickelt wurde. Es gibt drei separate Blot -Verfahren, nämlich Nord-, Süd- und Western -Verfahren, um eine bestimmte Art von Molekül zu erkennen. Die Northern Blotting -Technik wurde entwickelt, um eine spezifische RNA -Sequenz aus einer Mischung aus RNA nachzuweisen. Die Southern Blotting -Technik ermöglicht den Nachweis einer spezifischen DNA -Sequenz aus einer DNA.

Verweise
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2. Brown, t. „Southern Blot.Aktuelle Protokolle in der Immunologie. U.S. National Library of Medicine, Mai 2001. Netz. 27. März. 2017
3. Er, Shan l. „Northern Blot.”Methoden in der Enzymologie. U.S. National Library of Medicine, 2013. Netz. 27. März. 2017

Bild mit freundlicher Genehmigung:
1. "Northern Blot Schema" von RNA405 - eigene Arbeit (Public Domain) über Commons Wikimedia
2. "Western Blot 114a" von Amanthabagdon - eigene Arbeit (Public Domain) über Commons Wikimedia