Unterschied zwischen PCR und Echtzeit-PCR

Der Schlüsselunterschied zwischen PCR und Echtzeit-PCR ist, dass herkömmliche PCR zeitaufwändiger ist als Echtzeit-PCR, da sie die Gelelektrophorese verwendet, um die amplifizierten PCR-Produkte zu analysieren.

PCR- oder Polymerasekettenreaktion ist eine revolutionäre Entdeckung in der modernen Molekülbiologie, die 1983 vom Chemiker Kary Mullis entwickelt wurde. Es ermöglicht eine einzelne Sequenz in einer komplexen DNA für die Analyse.

INHALT

1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was ist PCR  
3. Was ist Echtzeit-PCR
4. PCR gegen Echtzeit-PCR in tabellarischer Form
5. Zusammenfassung - PCR gegen Echtzeit -PCR

Was ist PCR?

Die Grundidee der PCR- oder Polymerasekettenreaktion ist, dass zwei Primer, die zu den entgegengesetzten Strängen einer DNA -Sequenz komplementär sind, aufeinander ausgerichtet sind; Die Primer produzieren ergänzende Stränge, die jeweils den anderen Primer enthalten. Daher ist das Ergebnis eine große Menge einer Sequenz, die der DNA entspricht, die zwischen den beiden Primern liegt. Das DNA -Polymerase -Enzym wird verwendet, um die Primer in PCR zu erweitern. Die DNA -Polymerase ist ein thermostabiles Enzym und hat die Fähigkeit, bei hohen Temperaturen (94 bis 95 ° C) zu überleben, die für die Denaturierung der Template -DNA verwendet werden.

Die PCR umfasst drei Schritte, nämlich wiederholte Denaturierungsrunden, Tempern von Primern und Synthese von DNA. Eine Thermocycler -Maschine wird verwendet, um diese Reaktion auszuführen, damit sie programmiert werden kann, um die Temperaturen schnell und genau zu ändern. Zu den Anwendungen der PCR gehören kriminelle Untersuchungen, DNA -Fingerabdruck, Nachweis von Krankheitserregern und Analyse der DNA der frühen menschlichen Spezies.

Was ist konventionelle PCR?

Es gibt drei Hauptphasen von Konventionelle PCR: DNA -Amplifikationsphase, Trennung von PCR und Erkennung von Produkten. Die Trennung von DNA -Segmenten erfolgt typischerweise durch Agarosegelelektrophorese. Die Produkte werden dann mit Ethidiumbromid befleckt. Schließlich wird die Erkennung durch Visualisierung von Bändern auf Gelen unter UV -Licht erreicht. Daher werden die endgültigen Ergebnisse der konventionellen PCR nicht als Zahlen ausgedrückt. Normalerweise kann herkömmliche PCR nur einen einzelnen Parameter erkennen.

Was ist Echtzeit-PCR?

Echtzeit-PCR kann die Verstärkung von Produkten erkennen, da die Produkte synthetisiert werden. Mit der Entwicklung der Technologie ist PCR zu einer sehr beliebten Technik geworden, insbesondere zur Erkennung und Identifizierung von Bakterien in Lebensmitteln. Die Echtzeit-PCR verwendet ein floreszierendes Farbstoffsystem und Thermocycler, das mit fluoreszierender Detektionsfähigkeit ausgestattet ist.

Was ist der Unterschied zwischen PCR und Echtzeit-PCR?

Der Hauptunterschied zwischen PCR und Echtzeit-PCR besteht darin, dass die herkömmliche PCR zeitaufwändiger ist, da sie die Gelelektrophorese verwendet die Reaktion. Echtzeit-PCR sammelt Daten in der exponentiellen Wachstumsphase der PCR, während herkömmliche PCR Daten am Endpunkt der Reaktion sammelt. Darüber hinaus sind die Endpunktergebnisse der konventionellen PCR möglicherweise nicht sehr genau, aber die Ergebnisse der Echtzeit-PCR sind sehr präzise. Darüber hinaus ist Echtzeit-PCR empfindlicher als herkömmliche PCR.

Darüber hinaus hat die konventionelle PCR eine sehr schlechte Auflösung, während die Echtzeit-PCR aufgrund der hohen Auflösung nur sehr wenige Änderungen erkennen kann. Außerdem hat die Endpunktkennung herkömmlicher PCR einen kurzen Dynamikbereich, während die Echtzeit-PCR-Erkennung einen weiten Dynamikbereich aufweist. Im Gegensatz zu herkömmlichen PCR finden sich automatische Erkennungstechniken in Echtzeit-PCR. Die konventionelle PCR ist anspruchsvoller und arbeitsintensiver als Echtzeit-PCR. Im Gegensatz zu Echtzeit-PCR kann die konventionelle PCR nicht zwischen Toten und lebenden Bakterien unterscheiden. Darüber hinaus verwendet Echtzeit-PCR ein fluoreszierendes Farbstoffsystem, um die Produkte zu erkennen, während herkömmliche PCR Ethidiumbromid und UV-Licht verwendet, um Banden im Agarosegelmedium zu visualisieren.

Die folgende Infografik zeigt die Unterschiede zwischen PCR und Echtzeit-PCR in tabellarischer Form für den Nebenseitigen Vergleich.

Zusammenfassung -PCR gegen Echtzeit -PCR

Der Hauptunterschied zwischen PCR und Echtzeit-PCR besteht darin, dass die herkömmliche PCR zeitaufwändiger ist als Echtzeit-PCR, da die Gelelektrophorese zur Analyse der amplifizierten PCR-Produkte verwendet wird. Darüber hinaus verwendet Echtzeit-PCR ein fluoreszierendes Farbstoffsystem, um die Produkte zu erkennen, während herkömmliche PCR Ethidiumbromid und UV-Licht verwendet, um Banden im Agarosegelmedium zu visualisieren.

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1. "Polymerase-Kettenreaktions-en" von Enzoklop-eigene Arbeit (CC BY-SA 4.0) über Commons Wikimedia