Unterschied zwischen RT PCR und qPCR

Schlüsselunterschied - RT PCR gegen QPCR
 

Die Polymerasekettenreaktion ist eine Technik, mit der eine bestimmte DNA -Region amplifiziert wird in vitro. Aufgrund der Erfindung dieser Technik durch Kary Mullis im Jahr 1983 können Wissenschaftler für Forschungszwecke Tausende bis Millionen Kopien spezifischer DNA -Fragmente herstellen. Derzeit ist es eine gemeinsame und routinemäßig durchgeführte Technik in klinischen und Forschungslabors für eine Vielzahl von Anwendungen geworden. Es gibt Variationen der herkömmlichen PCR -Technik wie RT -PCR, verschachtelte PCR, Multiplex -PCR, q PCR, RT - QPCR usw. RT PCR und Q PCR sind zwei wichtige Variationen der PCR. Der Hauptunterschied zwischen RT PCR und Q PCR ist das RT -PCR wird verwendet, um die Genexpression durch Erstellung von zu erkennenKomplementäre DNA (cDNA) Transkripte aus RNA während Q PCR wird verwendet, um die PCR -Produkte in Echtzeit mit fluoreszierenden Farbstoffen quantitativ zu messen.

INHALT
1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was ist RT PCR
3. Was ist QPCR
4. Seite an Seitenvergleich - RT PCR gegen QPCR
5. Zusammenfassung

Was ist RT PCR?

Reverse Transkriptionspolymerasekettenreaktion (RT PCR) ist eine Variante der PCR, die zum Nachweis der RNA -Expression verwendet wird. Es ist eine sehr wichtige Methode zum Nachweis der mRNA -Expression in Geweben. RT PCR wird verwendet, wenn das Ausgangsmaterial der Probe RNA ist. In RT PCR wird die Vorlagen -mRNA zuerst in eine komplementäre DNA umgewandelt. Dieser Schritt wird durch die Enzym -Reverse -Transkriptase katalysiert und der Prozess wird als Reverse -Transkription bezeichnet. Zweitens wird die traditionelle PCR für die neu synthetisierte cDNA für die Verstärkung eingesetzt.

RT PCR ist eine hochempfindliche Technik, die eine relativ geringe Menge an RNA -Probe erfordert. RT -PCR wird häufig bei der Diagnose und Quantifizierung von RNA -Spezies verwendet, insbesondere bei RNA.

Abbildung 01: RT -PCR -Technik

Was ist QPCR?

Quantitative PCR (qPCR) ist eine Variante von PCR, mit der die PCR -Produkte quantitativ messen werden. Es wird auch als Echtzeit-Polymerasekettenreaktion bezeichnet, da es die Amplifikation der Echtzeit mithilfe der Echtzeit-PCR-Maschine misst. Es ist eine geeignete Methode zur Bestimmung der Menge einer Zielsequenz oder eines in einer Probe vorhandenen Gens. Das interessante Merkmal von qPCR ist, dass es sowohl Amplifikation als auch echte Quantifizierung zu einem einzigen Schritt kombiniert. Daher kann die Notwendigkeit einer Gelelektrophorese im Nachweis durch die qPCR -Technik beseitigt werden. QPCR verwendet fluoreszierende Farbstoffe, um PCR -Produkte während der PCR -Reaktionen zu kennzeichnen, die schließlich zu einer direkten Quantifizierung führen. Wenn sich die PCR -Produkte ansammeln, werden auch die fluoreszierenden Signale akkumuliert und werden von der Echtzeitmaschine gemessen. QPCR kann mit RT PCR kombiniert werden. Es ist als RT - QPCR oder QRT - PCR bekannt und gilt als eine äußerst leistungsstarke, empfindliche und quantitative Methode zum Nachweis von RNA -Spiegeln in den Zellen oder Geweben.

SYBR Green und Taqman sind zwei Methoden zur Erkennung oder Beobachtung des Amplifikationsprozesses der Echtzeit -PCR. Das SYBR Green -Verfahren wird unter Verwendung eines fluoreszierenden Farbstoffs namens SYBR Green durchgeführt und die Amplifikation durch Bindung des Farbstoffs zur Herstellung doppelstrangierter DNA erfasst. Taqman wird unter Verwendung von zwei markierten Sonden durchgeführt und erkennt die Amplifikation durch Abbau der Sonde durch Taq-Polymerase und Freisetzungen des Fluorophors, wie in Abbildung 02 gezeigt. Beide Methoden überwachen den Fortschritt des Amplifikationsprozesses und melden die Menge des Produkts in Echtzeit.

Echtzeit PCR hat eine Vielzahl von Anwendungen wie die Genexpressionsquantifizierung, microRNA- und nichtkodierende RNA -Analyse, SNP -Genotypisierung, Nachweis von Kopienzahlvarianten, Nachweis seltener Mutationen, Nachweis genetisch veränderter Organismen, Nachweis von infektiösen Wirkstoffen usw. usw.

Abbildung 02: Quantitative PCR -Technik

Was ist der Unterschied zwischen RT PCR und QPCR?

Zusammenfassung - RT PCR gegen QPCR

RT PCR und QPCR sind zwei Versionen der traditionellen PCR. Die RT -PCR -Technik wird für mRNA. QPCR wird verwendet, um PCR -Produkte während der Echtzeit -PCR -Thermozyklen mit fluoreszierenden Farbstoffen oder markierten Sonden zu quantifizieren. In QPCR wird die Menge an PCR -Produkt durch die emittierten Fluoreszenzsignale durch die Probe dargestellt. RT -PCR wird im Volksmund als Amplifikationsprozess verwendet, während qPCR üblicherweise als Quantifizierungsprozess verwendet wird. Dies ist der Unterschied zwischen RT PCR und QPCR.

Verweise:
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Bild mit freundlicher Genehmigung:
1. "Taqman" von Benutzer: Brainerdayaged- eigene Arbeit des ursprünglichen Uploaders (Public Domain) über Commons Wikimedia
2. „Reverse Transkriptionspolymerase -Kettenreaktion“ von JPARK623 - eigene Arbeit (CC BY -SA 3.0) über Commons Wikimedia