Unterschied zwischen SDS -Seite und Western Blot
Schlüsselunterschied - SDS -Seite gegen Western Blot
Western Blot ist eine Technik, die ein spezifisches Protein aus einer Proteinprobe nachweist. Diese Technik wird über mehrere wichtige Schritte durchgeführt: Gelelektrophorese, Blot und Hybridisierung. Natriumdodecylsulfat -Polyacrylamid -Gelelektrophorese (SDS -Seite) ist eine Art Gelelektrophorese -Technik, mit der Proteine gemäß ihren Größen (Molekulargewichte) trennen wird. Western Blot ist ein spezielles Blatt einer Blot -Membran, mit der das gleiche Muster der Proteine auf der SDS -Seite übertragen wird. Der Hauptunterschied zwischen SDS -Seite und Western Blot ist das Die SDS -Seite ermöglicht die Trennung von Proteinen in einer Mischung während Western Blot ermöglicht die Nachweis und Quantifizierung eines bestimmten Proteins aus einer Mischung. Beide sind nützlich in Proteinanalysestudien.
INHALT
1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was ist SDS -Seite
3. Was ist Western Blot
4. Seite an Seite Vergleich - SDS -Seite gegen Western Blot
5. Zusammenfassung
Was ist SDS -Seite?
SDS -Seite ist eine Gelelektrophorese -Technik, die zur Proteintrennung verwendet wird. Es wird häufig in Biochemie, Genetik, Forensik und molekularen Biologie verwendet. Sobald die Proteine aus der Probe extrahiert wurden, werden sie auf einem Gel aus SDS und Polyacrylamid betrieben. SDS ist ein anionisches Reinigungsmittel, mit dem Proteine linearisiert und linearisierten Proteinen proportional zu ihrer Molekülmasse eine negative Ladung verleihen und eine negative Ladung verleihen. Polyacrylamid wird zur soliden Unterstützung für das Gel. Denaturierte Proteine, die negativ geladen sind. Gemäß den Größen der Proteine unterscheiden sich die Migrationsgeschwindigkeiten zwischen Proteinen und Trennung tritt auf. Daher ist die SDS -Seite nützlich für die Trennung einzelner Proteine anhand ihrer Größen.
Die Herstellung des Polyacrylamidgels zur Fraktionierung von Proteinen ist ein entscheidender Schritt auf der SDS -Seite. Die korrekte Konzentration von Polyacrylamid und die Art des Vernetzungsmittels beeinflussen die physikalischen Eigenschaften des Gels stark, wodurch die tatsächliche Trennung der verschiedenen Proteine führt. Die Porengrößen des Gels sollten ordnungsgemäß für eine effektive Trennung verwaltet werden. Die SDS-Seite wird jedoch als hochauflösende Protein-Trennungstechnik angesehen.
Die SDS -Seitentechnik hat eine große Einschränkung der Proteinanalyse. Da SDS vor der Trennung Proteine denatiert, erlaubt es nicht den Nachweis der enzymatischen Aktivität, Proteinbindungswechselwirkungen, Protein -Cofaktoren usw.
Abbildung 01: SDS -Seite
Was ist Western Blot?
Western Blotting -Technik ermöglicht den Nachweis eines spezifischen Proteins aus einem Proteingemisch und die Messung der Menge und des Molekulargewichts des Proteins. Western Blot ist die Membran, die während des Blot-Verfahrens verwendet wird, um das Spiegelbild der Proteinmuster im SDS-Polyacrylamidgel zu erhalten. Die für das Western Blot verwendete Membran besteht hauptsächlich aus Nitrocellulose- oder Polyvinylidendifferenz (PVDF). Die Membran mit dem übertragenen Protein kann verwendet werden, um das gewünschte Protein zu identifizieren. Es erfordert einen hochwertigen Antikörper zum Nachweis des gewünschten Proteins durch Hybridisierung. Der Antikörper bindet an sein spezifisches Antigen und zeigt das Vorhandensein des gewünschten Antigens, das ein Protein ist.
Die Übertragung der Proteine aus dem SDS -Polyacrylamidgel in den Western Blot wird durch Elektroblock durchgeführt. Es ist eine effektive und schnelle Methode, die dazu führt, dass die Proteine elektrophoresisch aus dem Gel herausgeholt werden und auf die Nitrocellulosemembran (Western Blot) geleitet werden.
Abbildung 02: Western Blot
Was ist der Unterschied zwischen SDS -Seite und Western Blot?
SDS -Seite gegen Western Blot | |
| Die SDS -Seite ist eine Gelelektrophorese -Technik. | Western Blot ist eine Technik, die an einer Membran durchgeführt wird, um ein bestimmtes Protein aus einer Mischung zu erkennen. |
| Verwenden | |
| Die SDS -Seite ermöglicht die Trennung von Proteinen gemäß ihren Größen. | Western Blot ermöglicht die Übertragung von Proteinen auf das SDS -Seitengel, ohne das Muster zu ändern, und ermöglicht die Hybridisierung mit spezifischen Antikörpern. |
| Nachteile | |
| Protein-Denaturierung, hohe Kosten und Vorhandensein von Neurotoxinchemikalien sind die Nachteile dieser Technik. | Diese Technik ist zeitaufwändig und erfordert eine gute erfahrene persönliche und spezifische kontrollierte Bedingungen. |
Zusammenfassung -SDS -Seite gegen Western Blot
SDS -Seite und Western Blot sind zwei Methoden, die an der Proteinanalyse beteiligt sind. Die SDS -Seite ermöglicht eine einfache Trennung von Proteinen in einem Gel gemäß ihrem Molekulargewicht. Western Blot bestätigt, das Vorhandensein und die Menge eines spezifischen Proteins durch Hybridisierung mit spezifischen Antikörpern zu bestätigen. Dies ist der Unterschied zwischen SDS -Seite und Western Blot.
Verweise:
1. Blancher, c., und ein. Jones. „SDS -Seite und Western Blotting -Techniken.Methoden in der molekularen Medizin. U.S. Nationalbibliothek für Medizin, n.D. Netz. 27. März. 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig und David H. Peting. „Native SDS-PAGE: Elektrophoretische Trennung von Proteinen mit hoher Auflösung nativer Eigenschaften, einschließlich gebundener Metallionen.Metallomik: Integrierte Biometalwissenschaft. U.S. National Library of Medicine, Mai 2014. Netz. 27. März. 2017.
Bild mit freundlicher Genehmigung:
1. "SDS-PAGE-Elektrophorese" von Bensaccount bei English Wikipedia (CC von 3.0) über Commons Wikimedia
2. "Western Blot 114a" von Amanthabagdon - eigene Arbeit (Public Domain) über Commons Wikimedia
