Unterschied zwischen SYBR Green und Taqman

Schlüsselunterschied - SYBR Green gegen Taqman
 

SYBR Green und Taqman sind zwei Methoden zur Erkennung oder Beobachtung des Amplifikationsprozesses von Echtzeit-PCR. SYBR Green ist eine Methode, die auf interkalierenden Nukleinsäurefärbungsfarbstoff basiert, während Taqman eine Methode basiert, die auf Hydrolysesonde basiert. Beide Technologien sind so konzipiert, dass sie während der PCR Fluoreszenz erzeugen, sodass die Echtzeit-PCR-Maschine die Reaktion in „Echtzeit“ überwachen kann. Das SYBR Green -Verfahren wird unter Verwendung eines fluoreszierenden Farbstoffs namens SYBR Green durchgeführt und die Amplifikation durch Bindung des Farbstoffs an produzierte doppelsträngige DNA erfasst. Taqman wird unter Verwendung von zwei markierten Sonden durchgeführt und die Amplifikation durch Abbau der Sonde durch Taq-Polymerase und Freisetzungen des Fluorophors nachgewiesen. Dies ist der Hauptunterschied zwischen SYBR Green und Taqman.

INHALT
1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was ist SYBR Green
3. Was ist Taqman?
4. Nebenseitiger Vergleich - SYBR Green gegen Taqman
5. Zusammenfassung

Was ist SYBR Green?

SYBR Green ist ein fluoreszierender Farbstoff, der zur Färbung von Nukleinsäuren verwendet wird, insbesondere doppelt gestrandete DNA in der Molekülbiologie. SYBR Green-Methode wird verwendet, um PCR-Produkte während der Echtzeit-PCR zu quantifizieren. Sobald es mit DNA bin. Dies geschieht aufgrund der strukturellen Veränderung, die im Farbstoffmolekül beim Binden mit doppelsträngiger DNA auftritt. Wenn PCR immer mehr DNA erzeugt, binden Sie mehr Farbstoffmoleküle mit DNA, wodurch mehr Fluoreszenz erzeugt wird. Daher nimmt die Fluoreszenz mit der Akkumulation der PCR -Produkte zu. Daher kann die Menge des PCR -Produkts quantitativ durch den Erkennung von SYBR Green Fluoreszenz gemessen werden.

SYBR -Grünfarbstoff kann auch zur DNA -Markierung in Zytometrie und fluoreszierender Mikroskopie verwendet werden. Ethidiumbromid wurde erfolgreich durch SYBR Green ersetzt, seit Ethidiumbromid ein krebserzeugter Farbstoff mit Entsorgungsproblemen während der DNA -Visualisierung in der Gelelektrophorese ist.

Es gibt Vor- und Nachteile der SYBR Green -Methode. Diese Methode ist sehr empfindlich, kostengünstig und einfach zu bedienen. Aufgrund seiner Fähigkeit, an eine doppelsträngige DNA zu binden.

Abbildung 01: SYBR Green -Technik

Was ist Taqman??

Taqman ist eine alternative Methode zu SYBR Green, um den Echtzeit-PCR-Prozess zu überwachen. Diese Methode hängt von der Exonuklease -Aktivität von TAQ -Polymerase -Enzym von 5 ' - 3' ab, um die Sonden während der Ausdehnung des neuen Strangs und der Freisetzung von Fluorophor abzubauen. In dieser Methode werden zwei markierte Sonden verwendet und basieren auf der Hydrolyse von Sonden. Sonden sind fluoreszenzmarkierte DNA -Oligonukleotide mit einem fluoreszierenden Reportermolekül (Fluorophor) am 5' -Ende und einem Quencher -Molekül am 3' -Ende. Sie sind so konzipiert, dass sie an die einzelnen Strangvorlage an der gegenüberliegenden Seite der Primer -Tänen binden. Taq-Polymerase fügt dem Primer Nukleotide hinzu und erweitert den neuen Strang in Richtung der zwei markierten Sonden. Sobald die TAQ -Polymerase die Sonde erfüllt. Sobald die Synthese des neuen Strangs abgeschlossen ist, wird die Sonde einem vollständigen Abbau ausgesetzt und das Fluorophor freigesetzt. Die Freisetzung von Fluorophor erzeugt Fluoreszenz. Fluoreszenz -Quencher -Molekül löscht das emittierte Licht effizient und erzeugt den Ausgang zur Quantifizierung des PCR -Produkts. Die Freisetzung von Fluorophoren und die Menge der PCR -Produkte sind proportional. Daher kann die Quantifizierung leicht durch die Taqman -Methode erfolgen.

Abbildung 02: Taqman -Methode

Die Taqman -Methode wird in Echtzeit -PCR, Quantifizierung der Genexpression, Nachweis von genetischen Polymorphismen, Quantifizierung von chromosomalen DNA -Deletionen, Bakterienidentifikation, Überprüfung der Microarray -Analyse, SNP -Genotypisierung usw. verwendet.

Was ist der Unterschied zwischen SYBR Green und Taqman?

Zusammenfassung -SYBR Green und Taqman

Taqman und SYBR Green sind zwei Methoden, die in Echtzeit-PCR (quantitative PCR) angewendet werden. Beide Methoden ermöglichen die Quantifizierung des PCR -Produkts effizient und stützen sich auf die Emission der Fluoreszenz. Die Taqman-Methode verwendet zwei markierte Sonden zum Nachweis der akkumulierten DNA, während SYBR Green-Methode einen fluoreszierenden Farbstoff verwendet. Beide Methoden haben auch unterschiedliche Anwendungen in der molekularen Biologie.

Referenz:
1. Tajadini, Mohamad Hasan, Mojtaba Panjehpour und Shaghayegh Haghjoy Javanmard. „Vergleich der SYBR-Green- und Taqman-Methoden in der quantitativen Echtzeit-Polymerasekettenreaktionsanalyse von vier Adenosinrezeptor-Subtypen.”Fortgeschrittene biomedizinische Forschung. Medikkennt Publications & Media Pvt Ltd, 2014. Netz. 13. März. 2017.
2. „Echtzeit-PCR-Grundprinzipien.Echtzeit -PCR, Quantitative (QPCR), Primer & Mastermix: Primerdesign Ltd. N.P., N.D. Netz. 13. März. 2017.
3. „SYBR Green und andere Echtzeit-PCR-Farbstoffe.Biocompare. N.P., 05 Apr. 2010. Netz. 14. März. 2017

Bild mit freundlicher Genehmigung:
1. "PCR with SYBR Green" von -ygonaar 23:09, 7. März 2006 (UTC) -Es ist eine Grafik, die von Ygonaar mit Power Point, CC BY -SA 3 erstellt wurde.0, https: // Commons.Wikimedia.org/w/Index.Php?Curid = 619528
2. "Taqman" von Benutzer: Brainerdayaged - eigene Arbeit (Public Domain) über Commons Wikimedia