Unterschied zwischen warmem und kaltem Trypsinisierung

Schlüsselunterschied - warm vs Kalt Trypsinisierung
 

Warme und kalte Trypsinisierung sind zwei Methoden,. Der Schlüsselunterschied Zwischen warmem und kaltem Trypsinisierung hängt, wie die Namen vermuten lassen, von der Temperatur ab, bei der das Trypsin zur Zelldisaggregation zugesetzt wird. Warme Trypsinisierung erfolgt unter höheren Temperaturbedingungen (36.5 - 37 ⁰C) während kalte Trypsinisierung unter niedrigen Temperaturbedingungen stattfindet.

Während des Prozesses der primären Zellkultivierung tierischer Zellen werden drei Hauptmethoden verwendet und haben sich als erfolgreich erwiesen. Die drei Methoden umfassen die mechanische Disaggregation von Zellen, die enzymatische Disaggregation von Zellen und die primäre Explantattechnik. Die enzymatische Disaggregation von Zellen, die zur Isolierung von Zellen führen, und sie wird durch das Protein-abbauende Enzym-Trypsin erfolgen. Daher wird dieser Prozess als Trypsinisierung bezeichnet. Trypsinisierung kann unter zwei verschiedenen Bedingungen durchgeführt werden. Warm Trypsinisierung ist die Methode zur Behandlung der Zellen mit Trypsin unter warmen Bedingungen bei einer Temperatur von 36.5 - 37 ⁰C. Kalte Trypsinisierung ist der Prozess der Trypsinbehandlung, der unter kälteren Bedingungen vorzugsweise in Eis stattfindet und sehr niedrige Temperaturen aufrechterhalten wird.

INHALT

1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was ist warme Trypsinisierung
3. Was ist kalte Trypsinisierung
4. Ähnlichkeiten zwischen warmem und kaltem Trypsinisierung
5. Nebenseitiger Vergleich - warm gegen kalte Trypsinisierung in tabellarischer Form
6. Zusammenfassung

Was ist warme Trypsinisierung?

Die Trypsinisierung kann durchgeführt werden. Trypsin ist ein Proteinabbau -Enzym, und das in Trypsinisierung verwendete Enzymmisch. Der Rohextrakt soll bei Proteinlyse und Zellauflösung effizienter sind, da er andere abbauende Enzyme enthält.

Warme Trypsinisierung ist die am häufigsten verwendete enzymatische Methode zur Zelldisaggregation, die unter höheren Temperaturbedingungen stattfindet. Vor der Behandlung durch Trypsinisierung wird das gewünschte Gewebe in kleinere Stücke gehackt. Es erleichtert den einfachen Disaggregationsprozess. Das gehackte Gewebe wird dann in einem speziellen Medium gewaschen.

Nach Abschluss des Waschschritt. Da diese Technik ein warmes Trypsinisierungsprotokoll impliziert, wird das Trypsin bei einer Temperatur von ca. 37 platziert ⁰C für ungefähr vier Stunden.

Abbildung 01: Trypsin

Der Inhalt wird gemischt und aufgeregt, indem Zentrifugationsmethoden zur Erleichterung des Protokolls verwendet werden und den Disaggregationsprozess beschleunigt werden. Sobald die empfohlene Zeit erreicht ist, können die Zellen vom Überstand abgeleitet werden. Die vom Überstand abgeleiteten Zellen werden dann zu einer bestimmten Temperatur und Zeit inkubiert.

Was ist kalte Trypsinisierung?

Kalte Trypsinisierung ist die andere Art der Trypsinisierung, die unter kalten Bedingungen stattfindet. In dieser Technik werden die gehackten und gewaschenen Zellen in Fläschchen auf Eis gelegt und dann mit Trypsin getränkt. Die Zeit des Einweichens ist viel länger - ca. 6 - 24 Stunden.

Nach Abschluss des Einweichungsverfahrens wird das Trypsin aus dem Zelllysat entfernt und die Gewebestücke werden bei 37 weiter inkubiert ⁰C für ungefähr 20 - 30 Minuten. Die Disaggregation der Zellen wird durch wiederholtes Pipettieren des Gewebemischs verursacht. Dadurch können die Zellen von der Membran dissoziieren und zum Überstand kommen. Sobald die Zellen im Überstand sind, werden sie inkubiert und bei gewünschter Temperatur und Zeitraum gewachsen.

Die kalte Trypsinisierungsmethode hat mehrere Vorteile

• Höhere Ausbeute an lebensfähigen Zellen, wenn die Zellschädigung minimiert wird. Die Zellschädigung wird minimiert, indem keine Zentrifugationsschritte verwendet werden.
• Höchst bequeme Methode.
• Weniger mühsam.

Die Hauptbeschränkung der kalten Trypsinisierungsmethode besteht darin, dass in einer Instanz keine großen Mengen verwendet werden können.

Was sind die Ähnlichkeiten zwischen warmem und kaltem Trypsinisierung?

• Sowohl warme als auch kalte Trypsinisierungsprozesse verwenden das Enzym -Trypsin zur Disaggregation von Zellen.
• Sowohl warme als auch kalte Trypsinisierungsprozesse werden in Zellkulturverfahren zur Disaggregation von Zellen verwendet.
• Sowohl bei warmen als auch bei kalten Trypsinisierungsbehandlungsverfahren stammen die Zellen vom Überstand ab.

Was ist der Unterschied zwischen warmem und kaltem Trypsinisierung?

Zusammenfassung - Warm vs Kalt Trypsinisierung

Die Trypsinisierung ist die Methode zur Verwendung des Proteinabbaues Enzym Trypsin zur Disaggregation und Herstellung von primären Zellkulturen während des Zellkultierprozesses. Es gibt zwei Haupttechniken der Trypsinisierung, basierend auf den während des Verfahrens verwendeten Temperaturen. Sie sind warme und kalte Trypsinisierung. Bei 37 wird warm Trypsinisierung durchgeführt ⁰C Während kalte Trypsinisierung unter eiskalten Bedingungen durchgeführt wird. Obwohl die kalte Trypsinisierung länger für die Fertigstellung dauert, soll eine höhere Ausbeute an lebensfähigen Zellen haben. Dies liegt an der Tatsache, dass Zellschäden bei kalten Trypsinisierung minimiert werden, da sie keine kräftigen Zentrifugationsschritte verwendet. Dies ist der Unterschied zwischen warmem und kaltem Trypsinisierung.

Referenz:

1.„Trypsinisierung.Trypsinisierung - Ein Überblick | Sciencedirect -Themen. Hier verfügbar 
2.„Primärzellkultur: 3 Techniken (mit Diagramm).”Biologische Diskussion, 16. Oktober. 2015. Hier verfügbar  

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1.'Trypsin Active Site'by fdardel - eigene Arbeit, (CC BY -SA 3.0) über Commons Wikimedia