Unterschied zwischen Nitrocellulose und PVDF
Schlüsselunterschied - Nitrocellulose gegen PVDF
Western Blot ist eine Methode, die die Nachweis und Quantifizierung spezifischer Proteine aus einer Proteinprobe ermöglicht. Die Zuverlässigkeit der Technik hängt von der Auswahl einer korrekten Membran für die Absorption von Proteinen aus dem Gel ab. Es gibt verschiedene Arten von mikroporösen Membranen. Nitrocellulose- und PVDF -Membranen sind zwei solche Membranen. Die Auswahl zwischen Nitrocellulose oder PVDF ist auch eine weitere Herausforderung beim Western Blotting. Sowohl Nitrocellulose als auch PVDF haben eine starke Proteinabsorptionskapazität. Der Schlüsselunterschied zwischen Nitrocellulose und PVDF -Membran ist das Nitrocellulosemembranen haben nicht die Fähigkeit, Antikörper abzustreifen und die Membran für Antikörper -Reproping wiederzuverwenden, während PVDF.
INHALT
1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was ist Nitrocellulose
3. Was ist PVDF
4. Seite an Seitenvergleich - Nitrocellulose gegen PVDF
5. Zusammenfassung
Was ist Nitrocellulose?
Nitrocellulose ist ein Polymer, das durch die Behandlung von Cellulose mit Salpetersäure hergestellt wird und zur Herstellung mikroporöser Membranen in der molekularen Biologie verwendet wird, insbesondere für Blottechniken wie Süd-, Nord- und Western Blotting. Porengrößen von Nitrocellulosemembranen reichen von 3 bis 20 µm. Nitrocellulose -mikroporöse Membranen erleichtern den Nachweis einer immunochemischen Reaktion auf der Oberfläche der Membran. Daher werden häufig Nitrocellulosemembranen zur Immobilisierung von Proteinen und zur Nachweis spezifischer Proteine im Western Blot verwendet. Nitrocellulosemembranen können auch Glykoproteine und Nukleinsäuren immobilisieren.
Nitrocellulosemembranen werden aufgrund mehrerer Merkmale in lateralen Durchfluss -Assays bevorzugt. Nitrocellulosemembranen absorbieren Proteine in einer hohen Konzentration. Das zum Nässen der Membran verwendete Lösungsmittel verringert die Nitrocellulose -Membranprotein -Absorption nicht. Nitrocellulosemembranen können leicht auf die gewünschte Gelgröße geschnitten werden und Proteine durch elektrische oder Kapillarübertragung vom Gel auf die Membran übertragen werden. Nitrocellulose ermöglicht den schnelleren Proteinenfluss durch die Membran mit hohem Bindungspotential. Nitrocellulose zeigt eine verbesserte Stärke des Handlings. Ein weiteres spezielles Attribut der Nitrocellulosemembran ist, dass sie leicht mit nicht löslichem wasserfesten Klebstoffen auf verschiedene Plastikfaktoren geklebt werden kann.
Abbildung 01: Nitrocellulosemembran für Western Blotting
Was ist PVDF?
Polyvinylidendifluorid (PVDF) ist Fluoropolymer, das durch die Polymerisation von Vinylidendifferenz produziert wird und eine hohe Immobilisierungsfähigkeit von Proteinen aufweist. Daher werden mikroporöse Membranen aus PVDF in Western Blottechniken verwendet, um spezifische Proteine aus den Mischungen von Proteinen zu analysieren. PVDF -Membranen können auch für die Aminosäureanalyse und die Proteinsequenzierung verwendet werden. Das wichtigste Merkmal der PVDF -Membran über Nitrocellulosemembran besteht darin.
PVDF -Membranen sind dicker als Nitrocellulosemembranen; Daher resistenter gegen Schäden während der Wiederverwendung. PVDF -Membranen sind stark hydrophobisch. Daher müssen sie vor der Verwendung in Methanol oder Isopropanol getränkt werden.
Was ist der Unterschied zwischen Nitrocellulose und PVDF?
Nitrocellulose gegen PVDF | |
| Nitrocellulose ist ein Polymer, das aus Cellulose besteht. | PVDF ist ein Fluoropolymer, das durch die Polymerisation des Vinylidendifferenzierung produziert wird. |
| Membranporengröße | |
| Typische Porengrößen sind 0.1, 0.2 oder 0.45 μ | Typische Porengrößen sind 0.1, 0.2 oder 0.45 μm |
| Proteinbindungskapazität | |
| Nitrocellulose hat eine Proteinbindungskapazität von 80 bis 100 μg/cm2. | PVDF hat eine Proteinbindungskapazität von 170 bis 200 μg/cm2. |
| Empfindlichkeit | |
| Dies hat eine geringe Empfindlichkeit im Vergleich zu PVDF. | Dies hat eine hohe Empfindlichkeit. |
| Nachweis von niedrig exprimierten Proteinen | |
| Da die Empfindlichkeit in Nitrocellulosemembranen gering ist, ist sie nicht zum Nachweis von niedrig exprimierten Proteinen geeignet. | Dies eignet sich besser für den Nachweis von niedrig exprimierten Proteinen aufgrund seiner hohen Empfindlichkeit. |
| Hintergrundgeräusche | |
| Dies hat geringere Hintergrundgeräusche | Dies hat ein höheres Hintergrundgeräusch. |
| Wechselwirkungen mit Proteinen | |
| Proteinmoleküle binden an Nitrocellulosemembranen durch hydrophobe Wechselwirkungen. | Proteine binden an PVDF -Membranen durch hydrophobe und Dipolwechselwirkungen. |
| Art der Membran | |
| Nitrocellulose ist spröde und zerbrechlich. Versionen von Nitrocellulose sind jedoch verfügbar und sie sind resistent. | PVDF ist langlebiger und hat eine höhere chemische Resistenz. |
| Fähigkeit, sich zu entfernen und wiederverwenden | |
| Nitrocellulose kann Schwierigkeiten haben, das Signal zu stritzen und wiederzuerlösen, ohne das Signal zu verlieren. | PVDF ist ideal für Reproping- und Sequenzierungsanwendungen. |
| Eignung | |
| Nitrocellulose ist ideal, um Proteine mit niedrigem Molekulargewicht nachzuweisen. | PVDF eignet sich besser zum Nachweis höherer Molekulargewichtsproteine. |
| Andere Verwendungen | |
| Nitrocellulos. | PVDF kann für Proteinsequenzierung und feste Phasen -Assay -Systeme verwendet werden. |
| Kosten | |
| Dies ist billiger als PVDF -Membranen. | Dies ist teurer als Nitrocellulosemembranen. |
| Notwendigkeit vor dem Erlesen | |
| Nitrocellulosemembranen erfordern keine Voraussetzung mit Methanol | PVDF -Membranen benötigen Voraussetzung mit Methanol. |
Zusammenfassung -Nitrocellulose gegen PVDF
Nitrocellulosemembranen waren die ersten Membranen. Sie haben eine hohe Kapazität, um Proteine zu absorbieren. Daher werden Nitrocellulosemembranen im Western Blot verwendet. PVDF ist eine andere Art von Membran, die beim Western Blot verwendet wird, und hat auch eine starke Proteinabsorptionskapazität. Beide Typen werden im Western Blot für die Proteinanalyse verwendet. PVDF -Membranen haben jedoch spezieller Attribute, was sie besser als Nitrocellulosemembranen für Western Blot geeignet ist. Nitrocellulosemembranen sind jedoch besser geeignet, um niedrig molekular gewichtete Proteine nachzuweisen. PVDF -Membranen eignen. Dies ist der Unterschied zwischen Nitrocellulose- und PVDF -Membranen.
Bild mit freundlicher Genehmigung:
1."Western Blot Transfer" von Bensaccount in englischer Wikipedia (CC von 3.0) über Commons Wikimedia
Referenz:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun und Thomas a. Neubert. „Verwendung von Nitrocellulosemembranen zur Proteincharakterisierung durch matrixunterstützte Laserdesorption/Ionisationsmassenspektrometrie." Analytische Chemie. U.S. National Library of Medicine, 15. Juli 2006. Netz. 28. März. 2017
2.”Molekulare Marker und Pflanzenbiotechnologie." Google Bücher. N.P., N.D. Netz. 28. März. 2017
3.Montag, 8. April 2013 Tweet. „Die Magie in der Membran: Wählen Sie mit Bedacht für Best Western -Blot -Ergebnisse.Biocompare. N.P., 08 Apr. 2013. Netz. 28. März. 2017
