Unterschied zwischen PCR -Primern und Sequenzierungsprimern

Schlüsselunterschied - PCR -Primer vs Sequenzierung Primer
 

Mit den jüngsten Entwicklungen im Bereich der molekularen Biologie wurden verschiedene genetische Techniken entwickelt, die die Untersuchungsprozesse unterschiedlicher Wege des Subjekts einfach und genau machten. PCR und andere Sequenzierungsverfahren sind zwei wichtige solche Techniken. Sie verwenden verschiedene Unterkomponenten. Primer gelten als die wichtigsten Subkomponenten, die sowohl PCR- als auch Sequenzierungstechniken gemeinsam sind. PCR -Primer werden zur Amplifikation einer bestimmten DNA -Sequenz verwendet, während sEquingcing -Primer werden im Kontext der Sequenzierung eines DNA -Fragments verwendet. Dies ist das Schlüsselunterschied zwischen PCR -Primern und Sequenzierungsprimern.

INHALT

1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was sind PCR -Primer
3. Was sind Sequenzierungsprimer
4. Ähnlichkeiten zwischen PCR -Primern und Sequenzierungsprimern
5. Seite für Seitenvergleich - PCR -Primer gegen Sequenzierungsprimer in tabellarischer Form
6. Zusammenfassung

Was sind PCR -Primer?

Die Polymerasekettenreaktion (PCR) ist eine genetische Technik, die im Bereich der molekularen Biologie verwendet wird, um eine einzelne oder wenige Kopien eines bestimmten DNA -Segments zu amplifizieren und viele Millionen identischer Kopien zu erhalten. In einer PCR -Reaktion werden verschiedene Komponenten verwendet, einschließlich Primer. Primer sind kurze DNA-Stränge mit einer Nukleotidlänge von 18-25, was sie mit dem Start und dem Endbereich der zu verstärkten DNA. Primer können ein Vorwärtsprimer und eine umgekehrte Primer sein. Diese Primer binden an das DNA -Fragment an den spezifischen Punkten, an denen die DNA -Polymerase an den spezifischen Primer am Ort bin.

Die Auswahl der Primer ist ein wichtiger Aspekt des PCR -Prozesses. Die Auswahl der Länge des Primers ist wichtig. Die ideale Länge wäre 18-25 Nukleotide. Wenn die Länge zu kurz oder zu lang ist, binden die Primer nicht an die DNA -Sequenz, um genau zu verstärken. Primer, die zu kurz sind, führt zu einer nicht spezifischen Primer-Glühen an verschiedenen Stellen der DNA-Sequenz.

Abbildung 01: PCR -Primer

Der Gehalt von Guanine und Cytosin (GC) in einem guten Primer sollte im Bereich von 40-60 liegen. Die Primer -Glühtemperatur und die Schmelztemperatur sind wichtige Faktoren während der PCR. Die Schmelztemperatur sollte genau berechnet werden, und die Primer -Glühtemperatur sollte 5 betragen ⁰C weniger als die Schmelztemperatur. Die Schmelztemperatur sollte 60 ° C und 75 ° C betragen. Zu hohe oder zu niedrige Temperaturen führen zu einer geringeren aktiven DNA -Polymeraseaktivität.

Was sind Sequenzierungsprimer?

Sequenzierungsprimer werden im Kontext der Sequenzierung eines DNA -Fragments verwendet, um seine spezifische Identität zu enthüllen. Um gute Sequenzierungsergebnisse zu erhalten, sind hochwertige Primer und Vorlagen wichtig. Wenn Primer ausgewählt werden. Es sollte auch eine korrekte Ausrichtung sein, bei der die Sequenzen normalerweise von 3 'bis 5' Enden der Primer erzeugt werden. In der Sequenz sollte unerwünschte Selbsthybridisierung wie die Bildung von Haarnadelschleifen fehlen. Es sollte keine aufeinanderfolgende Bildung von Guaninbasen enthalten.

Die Schmelztemperatur (TM) des Primers muss für die Bedingungen der Sequenzierung geeignet sein. Daher sollte es zwischen 52 liegen^ÖC und 74^ÖC. Die Herstellung von Oligonukleotiden, die als Primer verwendet werden sollen. Wenn die Oligonukleotide Verunreinigungen enthalten, wird die Primersequenzsignalisierung von verschiedenen Primierungsstellen überlagert und verringert auch die Anzahl der Basenzellen.

Abbildung 02: Sequenzierung von Primern

Die Primer -Schmelztemperatur (TM) eines Oligonukleotids bestimmt, wie stark die komplementären DNA -Stränge miteinander hybridisiert werden. TM kann als thermodynamische Berechnung angesehen werden. Die TM ist während der PCR wichtig, wobei eine Variante, die als Zyklussequenzierung bezeichnet wird. Hier wird der sequenzierte Primer zunächst alternativ getempert, dann erweitert und zum Schluss für die Verstärkung denaturiert. Daher sollte der TM -Wert zwischen 52 liegen^ÖC und 74^Ö C. Synthetisierte Oligonukleotide können aus DNA/RNA -Syntheselabors gemäß der Wahl erhalten werden. Die kleine Skala der Synthese, die für die DNA -Sequenzierung verwendet wird. Vor allem die für die Sequenzierung verwendeten Primer sollten so gereinigt werden, dass sie frei von Verunreinigungen sind, die die Qualitätsreduzierung verhindern werden.

Was sind die Ähnlichkeiten zwischen PCR -Primern und Sequenzierungsprimern?

• Sowohl PCR -Primer als auch Sequenzierungsprimer sind Primer, die im Amplifikationsprozess einer gezielten DNA -Sequenz verwendet werden.
• Sowohl PCR -Primer als auch Sequenzierungsprimer bestehen aus Nukleotiden.
• Sowohl PCR -Primer als auch Sequenzierungsprimer sind kurze Oligomere.

Was ist der Unterschied zwischen PCR -Primern und Sequenzierungsprimern?

Zusammenfassung - PCR -Primer vs Sequenzierung Primer

Sequenzierungsprimer werden im Kontext der Sequenzierung eines DNA -Fragments verwendet, um seine spezifische Identität zu enthüllen. Ein Sequenzierungsprimer reicht aus, um den Prozess auszuführen. Um gute Sequenzierungsergebnisse zu erzielen, sind hochwertige Primer und Vorlagen wichtig. Wenn Primer ausgewählt werden. PCR-Primer sind kurze DNA-Stränge mit einer Nukleotidlänge von 18-25, die mit dem Start und dem Endbereich der DNA-Fragmente kompatibel ist, die amplifiziert werden sollen. PCR -Primer können ein Vorwärtsprimer und eine Rückprallprimer sein. Der Gehalt von Guanine und Cytosin (GC) in einem guten Primer sollte im Bereich von 40-60 liegen. Die Primer -Glühtemperatur und die Schmelztemperatur sind wichtige Aspekte während der PCR. Dies ist der Unterschied zwischen PCR -Primern und Sequenzierungsprimern.

Referenz:

1.„Polymerasekettenreaktion (PCR)." Khan Akademie. Hier verfügbar
2.„Sequenzierung Primer und Primer Design.”Sequenzierung Primer und Primer Design | Universitätskern -DNA -Dienste | Universität von Calgary. Hier verfügbar    

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1.'Primer revcomp'by zephyris - eigene Arbeit, (CC BY -SA 3.0) über Commons Wikimedia 
2.'DNA Sequencin 3 Marketing -Methoden'by Abizar (Original -Uploader) bei English Wikipedia - übertragen von Gustavocarra., (Public Domain) über Commons Wikimedia