Unterschied zwischen transienter und stabiler Transfektion
Schlüsselunterschied - vorübergehende vs stabile Transfektion
Transfektion ist ein Prozess, der an der Gentransfer eukaryotischer Zellen unter Verwendung chemischer oder physikalischer Methoden beteiligt ist. Die Transfektion kann in die beiden Haupttypen als Transienten -Transfektion und stabile Transfektion eingeteilt werden. Während der transienten Transfektion integriert sich das Gen von Interesse nicht in das Wirt -Genom und wird kurzfristig innerhalb des Wirtes im Wirt exprimiert, während in stabiler Transfektion das interessierende Gen in das Wirt -Genom integriert wird und in mehreren Generationen langfristig aufrechterhalten wirdS. Dies ist der Schlüsselunterschied zwischen transienter und stabiler Transfektion. In beiden Fällen ist die Transfektion erfolgreich und Gene werden exprimiert.
INHALT
1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was ist transiente Transfektion
3. Was ist eine stabile Transfektion
4. Seite an Seitenvergleich - transiente vs stabile Transfektion
5. Zusammenfassung
Was ist transiente Transfektion?
Die Transfektion ist ein wichtiges Instrument zum Einfügen von Genen in eukaryotische Zellen. Die transiente Transfektion ist unter den beiden Transfektionstypen ein häufiger Weg beim Gentransfer. Durch einen Vektor werden fremde Gene in Wirtszellen transformiert. Sobald fremde DNA in die Wirtszelle eintritt, hat sie zwei Optionen. Es kann sich entweder in das Genom des Wirts integrieren und sich replizieren oder drinnen bleiben, ohne in das Genom zu integrieren. Die transiente Transfektion zeigt die temporäre Expression der eingefügten Gene, ohne in das Wirtsgenom zu integrieren. Gene exprimieren und produzieren das codierte Protein, bis sich die Zelle teilt. Aufgrund der Unfähigkeit der Integration kann es jedoch nicht replizieren und zukünftigen Generationen eingehen. Diese Art der Transfektion ist für einen kurzen Zeitraum erfolgreich. Während der Zellteilung oder aufgrund anderer Faktoren wird die fremde DNA in den Abbau unterzogen. Transiente Transfektion wird gezeigt, wenn sich die fremde DNA in Form einer hoch gewickelten DNA befindet.
Abbildung 01: transiente Transfektion
Was ist eine stabile Transfektion?
Die stabile Transfektion zeigt eine erfolgreiche ausländische Genintegration in das Wirt -Genom. Sobald fremde DNA in die Wirtszelle eintritt. Daher repliziert und übergeht auch fremde DNA zu zukünftigen Generationen, wenn das Wirt -Genom repliziert. Diese Art der Transfektion ist komplex und selten. Aufgrund der stabilen Transfektion in das Genom wird dieses Merkmal jedoch über einen längeren Zeitraum von mehreren Generationen aufrechterhalten.
Eine stabile Transfektion ist ein schwieriger Prozess und erfordert eine wirksame Abgabe von DNA und Zellakquisition der fremden DNA in ihr Genom. Daher bevorzugt lineare DNA die stabile Transfektion als kreisförmige DNA. Die stabile Transfektionsrate beträgt jedoch ungefähr jeder von 104 transformierte Zellen. Eine stabile Transfektion kann durch die Cotransfomation eines selektierbaren Markers beobachtet werden und die künstliche Auswahl auf einem Medium durchführen.
Abbildung 02: stabile Transfektion
Was ist der Unterschied zwischen transienter und stabiler Transfektion?
Vorübergehende und stabile Transfektion | |
| Fremde DNA integriert sich nicht in ein Wirt -Genom. | Fremde DNA integriert sich in das Genom des Wirts und wird ein Teil davon. |
| Replikation innerhalb des Hosts | |
| Transient transfizierte Gene replizieren sich nicht innerhalb des Hosts. Daher werden Gene nicht an die nächsten Generationen übergeben. | Gene werden innerhalb des Hosts repliziert und an zukünftige Generationen übergeben. |
| Zeitdauer der Genexpression | |
| Gene werden für einen endlichen Zeitraum ausgedrückt und danach werden sie zerstört. | Gene werden Teil des Genoms und exprimiert für lange Zeit innerhalb der Generation. |
| Verwenden | |
| Dies ist nützlich, um die Auswirkungen der kurzfristigen Expression von Genen oder Genprodukten zu untersuchen. | Dies ist nützlich, um die Auswirkungen von Genausdrücken langfristig zu untersuchen. |
| Erkennung der Transfektion | |
| Gene werden exprimiert und können leicht nach dem Einfügen eines Reportergens nachgewiesen werden. | Eine stabile Transfektion kann leicht erkannt werden, indem ein ausgewählter Marker eingefügt und durch künstliche Auswahl auf den Medien ausgewählt wird. |
| Vorkommen und Prozess | |
| Transiente Transfektion ist häufig und nicht komplex, um durchzuführen. | Eine stabile Transfektion ist im Auftreten selten und komplex zu durchführen. |
| Natur der DNA | |
| Hoch -Supercoiled -DNA eignen sich zur transienten Transfektion. | Lineare DNA eignen sich für eine stabile Transfektion. |
| Anwendungen | |
| Dies wird für Untersuchungen des Gen -Knockdowns oder der Stummschaltung mit hemmenden RNAs und der Proteinproduktion in kleinem Maßstab verwendet | Dies wird für die Proteinproduktion in großem Maßstab längerfristig Pharmakologiestudien, Gentherapie, Forschung zu den Mechanismen der langfristigen genetischen Regulation verwendet |
Zusammenfassung -vorübergehende vs stabile Transfektion
Transiente und stabile Transfektionen sind zwei Arten von Transfektionen, die während des Gens, das durch nicht-viralbasierte Systeme in eukaryotische Zellen übertragen wurde, gezeigt. Transformierte Fremd -DNA ist nicht in die transiente Transfektion in das Wirtsgenom integriert, während sie sich in eine stabile Transfektion in das Wirtsgenom integriert. DNA mit kreisförmiger Wickel ist eine transiente Transfektion gezeigt, während lineare DNA eine stabile Transfektion bevorzugt. Dies ist der Unterschied zwischen vorübergehender und stabiler Transfektion. Die transiente Transfektion ist jedoch häufiger und einfacher als stabile Transfektion. Die Auswahl einer unter zwei hängt jedoch vom Zweck des Gentransfers und der Dauer des Forschungsprojekts ab.
Verweise:
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2. Kim, Tae Kyung und James H. Eberwine. „Säugetierzelltransfektion: Die Gegenwart und die Zukunft.”Analytische und bioanalytische Chemie. Springer-Verlag, Aug. 2010. Netz. 25. März. 2017
