Was ist der Unterschied zwischen Coomassie und Silberfärbung

Der Schlüsselunterschied zwischen Coomassie und Silberfärbung ist, dass die Coomassie -Färbung eine Proteinfärbungstechnik ist, die einen brillanten blauen Fleck mit Coomassie verwendet, während Splitterfärbung eine Proteinfärbungstechnik ist, die einen Silberfleck verwendet.

Proteintrennung und Identifizierung sind kritische Schritte in der Proteomanalyse. Sie brauchen eine hochauflösende Proteincharakterisierung nach Gelelektrophorese. Es gibt zahlreiche Färbetechniken, die verschiedene Flecken wie anionische Farbstoffe (Coomassie Brilliant Blue), Metallkationen (Imidazol-Zinc), Silberfärbung und fluoreszierende Farbstoffe usw. umfassen. Manchmal können auch radioaktive Sonden verwendet werden. Die Wahl der Färbungstechnik hängt von der Einfachheit, der Verfügbarkeit von Bildgebungsgeräten im Labor usw. ab.

INHALT

1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was ist Coomassie -Färbung
3. Was ist Silberfärbung
4. Ähnlichkeiten -Coomassie- und Silberfärbung
5. Coomassie gegen Silberfärbung in tabellarischer Form
6. Zusammenfassung -Coomassie gegen Silberfärbung

Was ist Coomassie -Färbung?

Coomassie -Färbung ist eine Proteinfärbungstechnik, die einen brillanten blauen Fleck mit Coomassie verwendet. Es wird allgemein genannt Die Coomassie Blue -Technik. Coomassie Brilliant Blue ist das beliebteste anionische Protein-Dye. Dieser Fleck färbt normalerweise fast alle Proteine ​​mit einer guten quantitativen Linearität bei mittlerer Empfindlichkeit. Coomassie Brilliant Blue Flecken bindet nicht speziell an fast alle Proteine. Es gibt zwei verschiedene Coomassie Brilliant Blue Stain Varianten: R-250 und G-250. R-250 bietet kürzere Faltenzeiten, während G-250 in empfindlicheren und umweltfreundlicheren Formulierungen erhältlich ist.

Abbildung 01: Coomassie -Färbung

Coomassie -Farbstoffe sind in Massenspektrometriestudien und Proteinidentifikationsstudien sehr beliebt. Darüber hinaus ist Bio-sicherer Coomassie-Färbung eine nicht hazierte Formulierung von Coomassie Blue G-250, die derzeit auf dem Markt erhältlich ist. Der Vorteil dieser Formulierung besteht darin. Bio-sicherer Coomassie-Färbung bietet Sensibilitätsempfindlichkeit, das der herkömmlichen Coomassie Blue G-250 entspricht, aber besser als Coomassie-Färbung R-250. Darüber hinaus hat es ein einfacheres und schnelleres Färbungsprotokoll als das herkömmliche Coomassie Blue G-250. Der Nachteil der Coomassie -Blue -Färbung ist, dass es im Vergleich zur Silberfärbung weniger empfindlich ist.  Die Coomassie-Blue-Färbung ist ungefähr 50-fach weniger empfindlich als Silberfärbung. Aufgrund seiner Einfachheit bei der Bindung wird es jedoch in vielen Studien bevorzugt.

Was ist Silberfärbung?

Silberfärbung ist eine Proteinfärbungstechnik, die einen Silberfleck verwendet. Silberfärbung wird verwendet, um sowohl Agarose- als auch Polyacrylamidgele zu färben. Die Silberfärbung von Protein in Agarosegelen wurde erstmals 1973 von Kerenyi und Gallyas entwickelt. Später wurde es für Proteine ​​in Polyacrylamidgelen angepasst, die in SDS-PAGE verwendet werden. Derzeit wird auch Silberfärbung zur Färbung von DNA oder RNA verwendet. Um die Gele zu färben, werden die Gele in dieser Methode mit Silbernitratlösung inkubiert. Silberfärbung färbt die Stellen, an denen Proteine ​​von braun bis schwarz vorhanden sind.

Abbildung 02: Silberfärbung

Die Intensität der Silberfärbung hängt von der Primärstruktur des Proteins ab. Darüber hinaus kann die Sauberkeit der verwendeten Gefäße und die Reinheit der Reagenzien auch die Qualität der Silberfärbung beeinflussen. Der Nachteil der Silberfärbung ist jedoch, dass es nicht in der Lage ist, alle Proteine, insbesondere Glykoproteine ​​und Proteine ​​mit großen modifizierten Gruppen, an ihren Seitenketten gebunden zu sein, nicht nachweisen kann.

Was sind die Ähnlichkeiten zwischen Coomassie und Silberfärbung?

• Coomassie- und Silberfärbung sind zwei Techniken, die bei der Proteinfärbung verwendet werden.
• Sie können sowohl Proteine ​​als auch DNA flecken.
• Beide Fleckentechniken haben Nachteile.
• Diese Techniken haben ähnliche Schritte wie das Fixieren, Flecken und Entschlossenheit.

Was ist der Unterschied zwischen Coomassie und Silberfärbung?

Coomassie -Färbung ist eine Proteinfärbungstechnik, die Coomassie Brilliant Blue Flecken verwendet, während die Splitterfärbung eine Proteinfärbungstechnik ist, die Silberfärbung verwendet. Dies ist daher der Hauptunterschied zwischen Coomassie und Silberfärbung. Darüber hinaus ist die Coomassie -Färbung weniger empfindlich als die Silberfärbung.

Die folgende Infografik listet die Unterschiede zwischen Coomassie und Silberfärbung in tabellarischer Form für Seite für Seitenvergleich auf.

Zusammenfassung -Coomassie gegen Silberfärbung

Zur Visualisierung von Proteinen kann eine proteinspezifische Farbstoffbindungs- oder Farbproduktion chemische Reaktion durchgeführt werden. Dies wird als Proteinfärbung bezeichnet. Coomassie- und Silberfärbung sind zwei Techniken, die bei der Proteinfärbung verwendet werden. Coomassie -Färbungstechnik verwendet Coomassie Brilliant Blue Fleck, während die Splitterfärbung Silberfleck verwendet. Dies ist also der Hauptunterschied zwischen Coomassie und Silberfärbung.

Referenz:

1. R, Brunelle JL, Grün. „Coomassie Blue -Färbung.Methoden in der Enzymologie, u.S. Nationalbibliothek für Medizin.
2. Chevallet, Mireille et al. „Silberfärbung von Proteinen in Polyacrylamidgelen.Naturprotokolle, Nature Pub. Gruppe, 2006.

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1. "SDS-PAGE Coomasie gefärbt" von Piemmea-eigene Arbeit (CC BY-SA 3.0) über Commons Wikimedia
2. "Page Agstain MicroSat" von Parinoidmarvin - eigene Arbeit (CC BY -SA 3.0) über Commons Wikimedia