Was ist der Unterschied zwischen Gelfiltration und Affinitätschromatographie

Der Schlüsselunterschied zwischen Gelfiltration und Affinitätschromatographie ist, dass Gelfiltrationschromatographie von den Unterschieden im Molekulargewicht oder der Größe der Analytprobe abhängt, während die Affinitätschromatographie von der Affinität eines Analyten zu einem immobilisierten Liganden abhängt.

Der Begriff Chromatographie in der analytischen Chemie bezieht sich auf den Prozess der Trennung von Komponenten in einer Mischung unter Verwendung verschiedener Techniken. Chromatographie ist ein kollektiver Name, der eine verschiedene Anzahl verschiedener Methoden zur Trennung darstellt.

INHALT

1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was ist Gelfiltrationsschromatographie 
3. Was ist Affinitätschromatographie 
4. Gelfiltration gegen Affinitätschromatographie in tabellarischer Form
5. Zusammenfassung -Gelfiltration gegen Affinitätschromatographie 

Was ist Gelfiltrationsschromatographie?

Gelfiltrationschromatographie ist eine analytische Technik, bei der die Trennung von Komponenten vom Unterschied des Molekulargewichts oder der Größe abhängt. Diese Technik wird auch als Größenexklusionschromatographie oder Molekularsiiebchromatographie bezeichnet. Die Trennungstechnik in diesem Prozess hängt von der unterschiedlichen Fähigkeit von Molekülen in der Probe ab, in die Poren des Gelfiltrationsmediums einzudringen.

In der Gelfiltrationstechnik enthält die stationäre Phase Perlen aus hydratisiertem schwammartigen Material mit Poren von molekularen Abmessungen, die einen engen Bereich von Größen enthalten. Wenn wir eine wässrige Lösung bestehen, die aus Molekülen verschiedener Größen besteht. Im Gegensatz dazu gelangen die kleineren Moleküle in die Poren des Gels und neigen dazu, sich langsam durch die Säule zu bewegen. Moleküle entlegen in der Reihenfolge abnehmender Molekulargröße aus der Säule. Hier ist die Ausschlussgrenze des Gels die molekulare Masse der kleinsten Moleküle, die nicht in die Poren eines gegebenen Gels eindringen können.

Es gibt verschiedene Arten von Gelfiltrationstechniken, wie z. Die indirekte Gelfiltrationschromatographie ist bei der Bestimmung freier Schilddrüsenhormone nützlich. Steady-State-Gel-Filtrationschromatographie ist eine indirekte Technik, die hauptsächlich für die Messung freier Steroide wie Cortisol, Testosteron usw. nützlich ist. Gelperlendialyse hingegen ist eine Modifikation der stationären Gelfiltration, die vergleichsweise einfacher ist.

Was ist Affinitätschromatographie?

Affinitätschromatographie ist eine analytische Technik und eine Trennmethode, die von einer spezifischen Bindungswechselwirkung zwischen einem immobilisierten Liganden und seinem Bindungspartner abhängt. Einige Beispiele sind Antikörper-Antigenbindung, Enzym-Substrat-Bindung und Enzyminhibitor-Bindung. Daher hat diese Technik viele wichtige Anwendungen in der Nukleinsäureinreinigung, die Proteinreinigung aus Zelltrakten und die Reinigung aus Blut.

In dieser Technik ist die wichtigste Eigenschaft die Liganden -Immobilisierung. Dafür können wir verschiedene Materialien wie Acrylate und Kieselgel verwenden. Es ist wichtig, die sterische Interferenz des Zielmoleküls in den Liganden zu verhindern. Darüber hinaus ist ein Inhibitor an der festen Phase gebunden. Wir nennen diesen Inhibitor einen Abstandshalter. Klassischerweise besteht ein Abstandshalter aus einer Kohlenwasserstoffkette.

Die stationäre Phase der Affinitätschromatographie enthält den Kern, den Spacer und den Liganden. Manchmal hat es auch ein Metallion, das mit dem Liganden verbunden ist. Die am meisten bevorzugte feste Phase für die stationäre Phase in dieser Technik ist Agarosegel, da es leicht abgegeben werden kann, um die Säule mit Harzbetten jeder Größe zu füllen und zu verpacken, und sie ist groß genug, damit Biomoleküle frei in und durch die Perlen fließen können. Die Liganden können sich auf verschiedene Weise kovalent am Perlenpolymer befinden. Die häufigsten Abstandshalterverbindungen sind Cyanogen -Bromid, Epoxid, Epoxid mit C6 -Säure und Diamin. Andererseits unterscheidet sich der Ligand, den wir verwenden können, je nach Ziel, e.G., Antikörper-Antigen, Eisen oder Aluminiumionen-Phosphoproteine, Avidin-Biotin, Glutathion-GST, Chelator-His-markierte Proteine ​​usw.

Was ist der Unterschied zwischen Gelfiltration und Affinitätschromatographie?

Chromatographie ist eine wichtige analytische Technik. Gelfiltrationschromatographie und Affinitätschromatographie sind zwei wichtige Variationen der Chromatographie. Der Schlüsselunterschied zwischen Gelfiltration und Affinitätschromatographie besteht darin, dass die Gelfiltrationschromatographie von den Unterschieden im Molekulargewicht oder der Größe der Analytprobe abhängt, während die Affinitätschromatographie von der Affinität eines Analytes zu einem immobilisierten Ligand abhängt.

Zusammenfassung -Gelfiltration gegen Affinitätschromatographie

Es gibt verschiedene Arten von chromatographischen Techniken entsprechend ihrer Anwendung und der Art der Analytenprobe. Gelfiltration und Affinitätschromatographie sind zwei solcher Arten von Techniken. Der Schlüsselunterschied zwischen Gelfiltration und Affinitätschromatographie besteht darin, dass die Gelfiltrationschromatographie von den Unterschieden im Molekulargewicht oder der Größe der Analytprobe abhängt, während die Affinitätschromatographie von der Affinität eines Analytes zu einem immobilisierten Ligand abhängt.

Referenz:

1. „Gelfiltration.” Ein Überblick | Sciencedirect -Themen.
2. „Affinitätschromatographie: Die Prinzipien.” Cube Biotech.

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1. "Gelfiltrationschromatographie" von Matasnavickas - eigene Arbeit (CC BY -SA 4.0) über Commons Wikimedia
2. "Chromatographiespalte" (CC0) über kostenloses SVG