Was ist der Unterschied zwischen kolorimetrischem und fluorometrischem Assay

Der Schlüsselunterschied zwischen kolorimetrischem und fluorometrischem Assay ist, dass der kolorimetrische Assay die Konzentration von farbigen Verbindungen in einer Lösung bestimmt, während der fluorometrische Assay den kinetischen Mechanismus einer Lösung bestimmt.

Ein biochemischer Assay ist eine Technik, die die Aktivität eines biologischen Moleküls oder eines Substanz analytisch erkennt oder quantifiziert. Es ist ein in vitro Verfahren. Colorimetrischer Assay und fluorometrischer Assay sind zwei Arten von gemeinsamen biochemischen Tests, die in Laboratorien durchgeführt werden. Mehrere Techniken wie ELISA und Western Blot sind auch komplexe biochemische Assays zur Quantifizierung der Stoffwechselaktivität und Messung des funktionellen Verhaltens von Biomolekülen wie Proteinen, Enzymen und anderen kleinen Molekülen. Diese Arten von Assays werden zur Identifizierung von Protein-DNA-, Protein-RNA- und Protein-Protein-Wechselwirkungen verwendet.

INHALT

1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was ist ein kolorimetrischer Assay
3. Was ist ein fluorometrischer Assay
4. Ähnlichkeiten - kolorimetrischer und fluorometrischer Assay
5. Colorimetrische gegen fluorometrische Assays in tabellarischer Form
6. Zusammenfassung

Was ist ein kolorimetrischer Assay?

Ein kolorimetrischer Assay ist eine Technik, die die Konzentration farbiger Verbindungen in einer Lösung bestimmt. Mit anderen Worten, der kolorimetrische Assay ist eine Reaktion, die aufgrund einer enzymatischen oder chemischen Reaktion zwischen Reagenzien und Analyten zu einer Farbänderung führt. In der Biochemie werden kolorimetrische Tests praktiziert, um auf Enzyme, spezifische Verbindungen, Hormone, Antikörper und andere Analyten zu testen. Sie verwenden Colorimeter oder Spektrophotometer. Colorimeter sind Instrumente, die farbige Proben charakterisieren, um ein objektives Maß für Farbeigenschaften zu liefern. Ein Spektrophotometer ist ein Gerät, das die Lichtintensität als Funktion der Farbe oder Wellenlänge des Lichts misst.

Abbildung 01: kolorimetrischer Assay

Wie funktioniert ein kolorimetrischer Assay??

In einem kolorimetrischen Assay wird eine Platte mit einem bestimmten an die Brunnen gebundenen Antikörper hergestellt. Dann wird die Probe hinzugefügt. Dies kann es der Probe ermöglichen, an den Antikörper zu binden. Dann werden der Brunnen ein Nachweisantikörper und ein Substrat zugesetzt, um mit der Nachweissonde zu reagieren. Am Ende vor dem Lesen wird die Stop -Lösung hinzugefügt. Ein leerer gut bezeichneter Blank ist ohne die Probe übrig. Im kolorimetrischen Assay, desto dunkler die Farbe, desto größer ist die Analyt -Konzentration. Normalerweise wird nur eine Wellenlänge benötigt, um die Lektüre zu nehmen. Wenn es jedoch eine Referenzmessung gibt, werden zwei oder mehr Wellenlängen verwendet.

Was ist ein fluorometrischer Assay?

Der fluorometrische Assay ist eine Technik, die den kinetischen Mechanismus von Enzymreaktionen bestimmt. Ein fluorometrischer Assay erfolgt mit einer Bildung eines fluoreszierenden Produkts aus einem nicht fluoreszierenden Substrat oder und umgekehrt. Dieser Assay verwendet auch die Fluoreszenzresonanzenergie -Übertragung (Bund), wobei die enzymatische Reaktion die Position zweier Fluorophore im Substrat ändert und so die Fluoreszenzintensität verändert.

Abbildung 02: Fluorometrischer Assay

Fluorometrische Assays sind im Allgemeinen viel empfindlicher als andere Assays. Die diagnostischen Enzymschätzungen in Gewebe-, Zell- oder Flüssigkeitsproben von Patienten erhöhen sich aufgrund ihrer höheren Empfindlichkeit.

Wie funktioniert ein fluorometrischer Assay??

In einem fluorometrischen Assay wird der Probe in der Platte ein Substrat hinzugefügt, und die Fluoreszenzreaktion wird unter Verwendung des Plattenlesers eingenommen. Hier wird jede Zelle getrennt gemessen. Und undurchsichtige Platten werden in fluorometrischen Assays verwendet. Dies reduziert die Lichtstreuung. Für diese Art von Assay sind zwei Wellenlängen erforderlich. Eine Wellenlänge besteht darin, die Anregung und die andere Wellenlänge für die Emission zu erkennen.

Was sind die Ähnlichkeiten zwischen kolorimetrischem und fluorometrischem Assay?

• Colorimetrischer Assay und fluorometrischer Assay sind zwei Arten von biochemischen Assays.
• Beide Assays werden zur medizinischen Diagnostik durchgeführt.
• Diese Assays beinhalten eine enzymatische Reaktion.
• Beide Assays beinhalten ein Substrat und Analyten.

Was ist der Unterschied zwischen kolorimetrischem und fluorometrischem Assay?

Ein kolorimetrischer Assay ist eine Technik, die die Konzentration farbiger Verbindungen in einer Lösung bestimmt, während fluorometrischer Assay eine Technik ist, die den kinetischen Mechanismus von Enzymreaktionen bestimmt. Dies ist also der Hauptunterschied zwischen kolorimetrischem und fluorometrischem Assay. Darüber hinaus sind die fluorometrischen Assays empfindlicher als die kolorimetrischen Assays; Daher können fluorometrische Assays mehr Analyten erkennen. Dies ist daher ein weiterer wichtiger Unterschied zwischen kolorimetrischem und fluorometrischem Assay. Darüber hinaus erfordern fluorometrische Assays zwei Wellenlängen, während kolorimetrische Assays mit einer Wellenlänge durchgeführt werden.

Die folgenden Infografik tabuliert mehr Unterschiede zwischen kolorimetrischem und fluorometrischem Assay.

Zusammenfassung -kolorimetrischer gegen fluorometrischer Assay

Ein biochemischer Assay ist ein analytischer Prozess, der zur Bestimmung und Quantifizierung von zellulären Stoffwechselreaktionen verwendet wird. Colorimetrischer Assay und fluorometrischer Assay sind zwei Arten von biochemischen Assays. Der kolorimetrische Assay ist eine Reaktion, die aufgrund einer enzymatischen oder chemischen Reaktion zwischen Reagenzien und Analyten zu einer Farbänderung führt, während fluorometrischer Assay eine Technik ist, die verwendet wird, um den kinetischen Mechanismus von Enzymreaktionen zu bestimmen.  Beide Assays hängen von einer enzymatischen Reaktion ab, die ein Substrat und einen Analyten beinhaltet. Fluorometrische Assays sind empfindlicher als kolorimetrische Tests. Am wichtigsten ist, dass fluorometrische Assays zwei Wellenlängen erfordern, während kolorimetrische Assays mit nur einer Wellenlänge durchgeführt werden können. Dies fasst daher den Unterschied zwischen kolorimetrischem und fluorometrischem Assay zusammen.

Referenz:

1. „Colorimetrische Assays.”Experimentelle Biosschen.
2. „Fluorometrische Enzymassays.Kreative Enzyme.

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1. "Colorimetric Assay" von Sepehr Ehsani (CC BY-NC-ND 2.0) über Flickr
2. "Fluorimeter" von Matthias M. - Eigene Arbeit (CC von 3.0) über Commons Wikimedia