Unterschied zwischen Benzonase und DNase

Schlüsselunterschied - Benzonase gegen DNase
 

Der Abbau von Nukleinsäuren ist für viele molekulare Biologie -Techniken wichtig. Es wird in der rekombinanten DNA -Technologie häufig verwendet, um unerwünschte Fragmente von DNA und RNA loszuwerden. Nukleinsäureabbau Enzyme werden als Nukleasen bezeichnet und können unterschiedliche Typen auf der erforderlichen Funktion sein. Nukleasen, die DNA abbauen. Diese Enzyme werden hauptsächlich in verwendet in vitro Experimente wo In vitro Molekulare Tests werden durchgeführt, um reine DNA, RNA oder Proteine ​​zu isolieren. Benzonasen sind eine Art von Nukleasen, die sowohl DNA als auch RNA abbauen, während DNasen nur DNA abbauen. Dies ist der Schlüsselunterschied zwischen Benzonase und DNase.

INHALT

1. Überblick und wichtiger Unterschied
2. Was ist Benzonase
3. Was ist dnase
4. Ähnlichkeiten zwischen Benzonase und DNase
5. Nebenseitiger Vergleich - Benzonase gegen DNase in tabellarischer Form
6. Zusammenfassung

Was ist Benzonase?

Benzonase ist eine gentechnisch veränderte Endonuklease von Serratia marcescens. Dieses Enzym wird in produziert E. coli Gastgeber im industriellen Maßstab. Benzonase ist in der Lage, doppelsträngige DNA, lineare DNA, kreisförmige DNA und einzelnsträngige RNA zu spalten. Somit ist Benzonase kommerziell wichtig.  Benzonase -Enzym ist ein Proteindimer mit 245 identischen Aminosäuren, ~ 30 kDa -Untereinheiten mit zwei wesentlichen Disulfidbindungen. Benzonase spaltet Nukleinsäuren am 5' -Ende und führt zu Fragmenten mit freien 5'ends. Benzonase kann Nukleinsäuren in jeder Sequenz spalten, bevorzugen jedoch GC -reiche Regionen.

Benzonase ist bei -20 gespeichert ⁰C. Der optimale pH -Wert für die Enzymaktivität beträgt 8.0 - 9.2. Die Anwendungen der Benzonase umfassen die Probenpräparation für Protein -2D -Gelelektrophorese, bei der Benzonase gebunden. Es wird auch verwendet, um die Viskosität von Proteinenextrakten zu verringern und die Klumpen von Zellen in einem Zellgemisch zu verhindern.

Was ist dnase?

DNase ist ein nuklease, hydrolytisches Enzym, das nur doppelsträngige DNA spalten kann. Es gibt zwei Haupttypen von DNasen: DNase I und DNase II. DNase I nimmt an der Spaltung doppelsträngiger DNA teil, um Polynukleotide mit 5 'freien Enden zu produzieren. DNase II ist an der Spaltung doppelsträngiger DNA beteiligt, um Polynukleotidstränge mit 3 'freien Enden oder Überhängen zu erzeugen.

Dnase i

DNase I funktioniert zwischen 7 mit einem optimalen pH -Wert.0 - 8.0. Die Enzymaktivität hängt von vielen ionischen Cofaktoren ab, darunter CA, CA²⁺, Mg²⁺ oder mn²⁺. Die Aktivität von mg²⁺ und Mn²⁺ entscheidet die Funktion der DNase I. In Gegenwart von mg²⁺, Dnase i spaltet jeden Strang von dsDNA unabhängig. Dies findet zufällig statt. Im Gegensatz dazu in Gegenwart von Mn^2+, Das Enzym spaltet beide DNA -Stränge an ungefähr derselben Stelle. Diese Spaltung führt dazu, dass zwei Arten von DNA -Fragmenten erzeugt werden. Ein Typ mit stumpfen Enden und einem anderen Typ mit ein oder zwei Nukleotid -Überhängen.

Abbildung 02: DNase

DNase II

DNase II fungiert mit einem optimalen pH -Wert von 4.5-5.0 und zweiwertige Metallionen sind für seine Aktivität erforderlich, ähnlich wie DNase I. Es ist bekannt, dass der Mechanismus von DNase II aus drei Hauptschritten besteht.

1. Innerhalb des DNA -Rückgrats werden mehrere einzelne Strangbrüche induziert.
2. Säurelösliche Nukleotide und Oligonukleotide werden erzeugt.
3. In der letzten Phase tritt eine nichtlineare hyperchrome Verschiebung auf.

Die Hauptinhibitoren des DNase -Enzyms sind Metallchelatoren, Übergangsmetalle und Chemikalien wie Natriumdodecylsulfat und β - Mercaptoethanol.

Die Hauptanwendungen der DNase umfassen die Herstellung von DNA-freien RNA-Extrakten und Proteinextrakten sowie die Entfernung von Template-DNA während der In-vitro-Transkriptionsexperimente.

Was sind die Ähnlichkeiten zwischen Benzonase und DNase?

• Beide sind hydrolytische Enzyme.
• Beide sind Nukleasen.
• Beide nehmen durch Spalten der Phosphodiesterbindungen von Nukleinsäuren teil.
• Beide benötigen einen optimalen pH- und Lagertemperaturen, um die Aktivität des Enzyms aufrechtzuerhalten.
• Inhibitoren von Enzymen umfassen Chelatmittel, Übergangsmetalle und Waschmittelchemikalien.
• Anwendungen konzentrieren sich hauptsächlich darauf, hohe Reinheitsextrakte von DNA, RNA und Proteinen zu erhalten.
• Beide Enzyme können über Gentechnik produziert werden.

Was ist der Unterschied zwischen Benzonase und DNase?

Zusammenfassung -Benzonase gegen DNase

Nuklease -Enzyme werden in verschiedenen experimentellen Verfahren in Bezug auf die molekulare Biologie und die Gentechnik häufig eingesetzt. Benzonase und DNase sind zwei Arten von Nukleasen. Benzonase ist an der Abbau sowohl der DNA als auch der RNA beteiligt, während DNase an der Spaltung doppelsträngiger DNA beteiligt ist. Dies ist der grundlegende Unterschied zwischen Benzonase und DNase. Gegenwärtig werden beide Nuklease -Typen durch rekombinante DNA -Technologie hergestellt, die ein Enzyme mit höherer Qualität ergibt, die für die maximale Produktion optimiert werden.

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Verweise:

1.„Desoxyribonuklease I von Rinder -Bauchspeicheldrüse D5025.”Sigma-Aldrich, hier erhältlich. Zugriff am 19. September. 2017.
2. „Deoxyribonuklease II.”Deoxyribonuklease II - Worthington Enzymhandbuch, hier erhältlich. Zugriff am 19. September. 2017.

Bild mit freundlicher Genehmigung:

1."DNase Hypersensitive Stelle" von Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N, et al. - Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N, et al. (2012) Korrelation zwischen DNase I überempfindlicher Stätteverteilung und Genexpression in Hela S3 -Zellen. PLoS One 7 (8): E42414. doi: 10.1371/Journal.Pone.0042414 (CC BY-SA 2.5) über Commons Wikimedia